В процессе гликолиза не участвуют ферменты. Гликолиз, суть его реакций, энергетика, синтез сахаров при обращении гликолиза; цикл ди- трикарбоновых кислот, характеристика основных стадий цикла. я ступень. Фосфорилирование глюкозы

10.12.2023 Вопросы

Так было впервые установлено, что брожение может происходить вне живых клеток . В году Эдуард Бюхнер была присуждена Нобелевская премия по химии .

Со времени открытия внеклеточного брожения до 1940-х годов исследования реакций гликолиза было одной из основных задач биохимии . Описанием этого метаболического пути в клетках дрожжей занимались Отто Варбург , Ганс фон Эйлер-Хельпин и Артур Гарден (два последних получили Нобелевскую премию по химии 1929 ), в мышцах - Густав Эмбдена и Отто Меергоф (Нобелевская премия по медицине и физиологии 1922 ). Также свой вклад в исследование гликолиза сделали Карл Нойберг, Яков Парнас , Герти и Карл Кори .

Важными "побочными" открытиями, сделанными благодаря изучению гликолиза, была разработка многих методов очистки ферментов , выяснения центральной роли АТФ и других фосфорилированных соединений в метаболизме , открытие коэнзимов , таких как НАД .


2. Распространение и значение

Другими путями окисления глюкозы является пентозофосфатный путь и путь Ентнера-Дудорова . Последний является заменой гликолиза в некоторых грамотрицательных и, очень редко, грамположительных бактерий и имеет много общих черт с ним ферментов .


3. Реакции гликолиза

Традиционно гликолиз разделяют на две стадии: подготовительную, предусматривающий вклад энергии (пять первых реакций), и стадию отдачи энергии (пять последних реакций) . Иногда четвертую и пятую реакции выделяют в отдельную промежуточную стадию .

На первой стадии происходит фосфорилирование глюкозы в шестом положении, изомеризация полученного глюкозо-6-фосфата к фруктозо-6-фосфата, и повторное фосфорилирования уже в первом положении, в результате чего образуется фруктозо-1 ,6-бисфосфат. Фосфатные группы на моносахариды переносятся из АТФ . Это необходимо для активации молекул - увеличение содержания в них свободной энергии . Далее фруктозо-1 ,6-бисфосфат расщепляется до двух фосфотриоз, которые могут свободно превращаться друг в друга.

На второй стадии (отдачи энергии) фосфотриоза (глицеральдегид-3-фосфат) окисляется и фосфорилируется неорганическим фосфатом . Полученный продукт в серии екзергоничних реакций сопряженных с синтезом четырех молекул АТФ превращается в пирувата. Таким образом, при гликолиза происходит три принципиальных преобразования:


3.1. Первая стадия

3.1.1. Фосфорилирования глюкозы

Первая реакция гликолиза - фосфорилирование глюкозы с образованием глюкозо-6-фосфата, катализируемой ферментом гексокиназой . Донором фосфатной группы является молекула АТФ . Реакция происходит только в присутствии ионов Mg 2 + , так как настоящим субстратом для гексокиназы является не АТФ 4 -, а комплекс MgАТФ 2 -. Магний экранирует отрицательный заряд фосфатной группы, таким образом облегчая осуществление нуклеофильной атаки на последний атом фосфора гидроксильной группой глюкозы .

Вследствие фосфорилирования происходит не только активация молекулы глюкозы , но и ее "заключения" внутри клетки : плазматическая мембрана имеет белки-переносчики для глюкозы, но не для ее фосфорилированной формы. Поэтому большая заряженная молекула глюкозо-6-фосфата не может проникнуть через мембрану несмотря на то, что его концентрация в цитоплазме больше, чем во внеклеточной жидкости .


3.1.2. Изомеризация глюкозо-6-фосфата

Во второй реакции гликолиза происходит изомеризация глюкозо-6-фосфата к фруктозо-6-фосфата под действием фермента глюкозофосфатизомеразы (гексозофосфатизомеразы). Сначала происходит открытие шестичленного пиранозного кольца глюкозо-6-фосфата, т.е. переход этого вещества в линейную форму, после чего карбонильная группа из первого положения переносится во второй через промежуточную ендиольну форму . Есть альдозы превращается в кетоза. Образована линейная молекула фруктозо-6-фосфата замыкается в пятичленные фуранозне кольцо .

Через незначительное изменение свободной энергии реакция является обратимой. Изомеризация глюкозо-6-фосфата - это необходимое условие для дальнейшего прохождения гликолиза, поскольку следующая реакция - еще одно фосфорилирования, требует наличия гидроксильной группы в первом положении .


3.1.3. Фосфорилирования фруктозо-6-фосфата

После стадии изомеризации идет вторая реакция фосфорилирования , в которой фруктозо-6-фосфат превращается в фруктозо-1 ,6-бисфосфат за счет присоединения фосфатной группы АТФ . Реакцию катализирует фермент фосфофруктокиназы-1 (сокращенно ФФК-1, существует также фермент ФФК-2, катализирует образование фруктозо-2 ,6-бисфосфат в другом метаболическом пути) .

В условиях цитоплазмы клетки эта реакция является необратимой. Она первой достоверно определяет расщепление веществ по гилколитичному пути, поскольку глюкозо-6-фосфат и фруктозо-6-фосфат могут вступать в другие метаболические превращения, а фруктозо-1 ,6-бисфосфат используется только в гликолизе. Именно образование фруктозо-1 ,6-бисфосфат является лимитирующим стадией гликолиза .

У растений, некоторых бактерий и простейших также форма фосфофруктокиназы, использующий в качестве донора фосфатной группы пирофосфат , а не АТФ . ФФК-1 как алостеричний фермент подлежит сложным механизмам регулирования. К положительным модуляторов относятся продукты расщепления АТФ - АДФ и АМФ , рибулозо-5-фосфат (промежуточный продукт пентозофосфатного пути), у некоторых организмов фруктозо-2 ,6-бисфосфат. Негативным модулятором является АТФ .


3.1.4. Расщепление фруктозо-1 ,6-бисфосфат на две фосфотриозы

Фруктозо-1 ,6-бисфосфат расщепляется до двух фосфотриоз: глицеральдегид-3-фосфат и дигидроксиацетонфосфат под влиянием фруктозо-1 ,6-фосфатальдолазы (чаще просто альдолаза). Название фермента альдолазы происходит от обратной реакции альдольной конденсации . Механизм прохождения реакции показан на схеме:

Описанный механизм реакции характерен только для альдолазы класса I, распространенной в клетках растений и животных. В клетках бактерий и грибов присутствует альдолаза класса II, которая катализирует реакцию другим путем .

Механизм реакции альдольной расщепление еще раз демонстрирует важность изомеризации во второй реакции гликолиза. При таком преобразованию подлежала альдозы (глюкоза), то образовалась бы одна двокарбонова и одна чотирикарбонова соединение, каждая из которых должна метаболизироваться собственным шялхом. Зато трикарбонови соединения образованы в результате расщепления кетозы (фруктозы) могут легко превращаться друг в друга .


3.1.5. Изомеризация фосфотриоз

В последующих реакциях гликолиза участвует только одна из фосфотриоз образованных из фруктозо-1 ,6-бисфосфат, а именно глицеральдегид-3-фосфат. Однако другой продукт - дигидроксиацетонфосфат - быстро и обратно может превращаться в глицеральдегид-3-фосфат (катализирует эту реакция триозофосфатизомеразы) .

Механизм реакции похож на Изомеризацию глюкозо-6-фосфата в фруктозо-6-фосфат. Равновесие реакции смещено в сторону образования дигидроксиацетонфосфату (96%), однако из-за постоянного использования глицеральдегид-3-фосфата все время происходит обратное преобразование .

После преобразования двух "половинок" глюкозы в глицеральдегид-3-фосфат атомы Карбона , происходящих от ее C-1, C-2 и C-3, становятся химически неотличимы от C-6, C-5 и C-4 соответственно. Эта реакция завершает подготовительную стадию гликолиза .


3.2. Вторая стадия

3.2.1. Окисления глицеральдегид-3-фосфата

Изменение свободной энергии при окисления глицеральдегид-3-фосфата и фосфорлиювання образованного 3-фосфоглицерату, если они происходят последовательно (сверху) и если они сопряжены благодаря ковалентной связыванию промежуточного продукта с ферментом (снизу).

Первой реакцией стадии отдачи энергии гликолиза является окисление глицеральдегид-3-фосфата с одновременным его фосфорилированием, что осуществляется ферментом глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы. Альдегид превращается не в свободную кислоту , а в смешанный ангидрид с фосфатной кислотой (1,3-бисфосфоглицерат). Соединения такого типа - ацилфосфаты - имеют очень большую отрицательную смену свободной энергии гидролиза (ΔG 0 = -49,3 кДж / моль) .

Реакцию превращения глицеральдегид-3-фосфата до 1,3-бисфосфоглицерату можно рассматривать как два отдельных процесса: окисление альдегидной группы НАД + и присоединения фосфатной группы к образованной карбоновой кислоты . Первая реакция термодинамически выгодна (ΔG 0 = -50 кДж / моль), вторая наоборот невыгодна. Изменение свободной энергии для второй реакции почти такая же, только положительная. Если бы они происходили последовательно одна за другой, то вторая реакция требовала бы слишком большой энергии активации , чтобы протекать в условиях живой клетки с удовлетворительной скоростью. Но оба процессы сопряженными благодаря тому, что промежуточное соединение - 3-фосфоглицерат - ковалентно связана с остатком цистеина тиоестерним связью в активном центре фермента. Такой тип связи позволяет "законсервировать" часть энергии, выделяемой при окисления глицеральдегид-3-фосфата, и использовать ее для реакции с ортофосфатною кислотой .

Для прохождения этой стадии гликолиза необходимый кофермент НАД +. Его концентрация в клетке (менее 10 -5 М) значительно меньше, чем количество глюкозы, метаболизируется минуту. Поэтому в клетке постоянно происходит повторное окисления НАД + .


3.2.2. Перенос фосфатной группы 1,3-бисфосфоглицерату на АДФ

В следующей реакции большой запас энергии ацилфосфату используется для синтеза АТФ . Фермент фосфоглицераткиназа (название от обратной реакции) катализирует перенос фосфатной группы с 1,3-бисфосфоглицерату на АДФ , кроме АТФ продуктом реакции является 3-фосфоглицерат .

Шестая и седьмая реакции гликолиза сопряжены между собой и 1,3-бисфосфоглицерат является общим промежуточным продуктом. Первая из них сама по себе была бы ендергоничною, однако затраты энергии компенсируются второй - выражено екзергоничною . Суммарное уравнение этих двух процессов можно записать так:

Глицеральдегид-3-фосфат + АДФ + Ф н + НАД + → 3-фосфоглицерат + АТФ + НАДH (H +), ΔG 0 = -12,2 кДж / моль ;

Следует заметить, что для одной молекулы глюкозы эта реакция происходит дважды, поскольку из одной молекулы глюкозы были образованы две молекулы глицеральдегид-3-фосфата. Итак, на этом этапе синтезируются две молекулы АТФ , что покрывает энергетические затраты первой стадии гликолиза.


3.2.3. Изомеризация 3-фосфоглицерату

В восьмой реакции гликолиза фермент фосфоглицератмутаза в присутствии ионов Магния катализирует перенос фосфатной группы 3-фосфоглицерату с третьего положения в другое, в результате чего образуется 2-фосфоглицерат. Реакция происходит в два этапа: на первом из них фосфатная группа, изначально присоединена к остатку гистидина в активном центре фермента, переносится на C-2 3-фосфоглицерату, в результате чего образуется 2,3-бисфосфоглицерат. После этого фосфатная группа в третьем положении синтезированной соединения переносится на гистидин . Таким образом регенерируются фосфорилированный фермент и производится 2-фосфоглицерат .

Исходное фосфорилирования фосфоглицератмутазы осуществляется реакцией с 2,3-бисфосфоглицерату, незначительной концентрации которого достаточно для активации фермента .


3.2.4. Дегидратация 2-фосфоглицерату

Следующая реакция - образование Энола с результате дегидратации (отщепление воды) 2-фосфоглицерату - ведет к образованию фосфоенолпирувату (сокращенно ФЭП) и катализируется ферментом энолаза.

Это вторая реакция образования вещества с высоким потенциалом переноса фосфатной группы в процессе гликолиза. Изменение свободной энергии при гидролизе фосфатного эфира обычного спирта значительно ниже по сравнению с таким изменением при гидролизе енолфосфату, в частности для 2-фосфоглицерату ΔG 0 = -17,6 кДж / моль , а для фосфоенолпирувату ΔG 0 = -61,9 кДж / моль .


3.2.5. Перенос фосфатной группы с ФЭП на АДФ

Последняя реакция гликолиза - перенос фосфатной группы с фосфоенолпирувату на АДФ - катализируется пируваткиназы в присутствии ионов K + и Mg 2 + или Mn 2 + . Продуктом этой реакции является пируват , который сначала образуется в енольной форме, после чего быстро и неферментативно таутомеризуеться в кетонной форму .

Реакция имеет большую отрицательную смену свободной энергии , главным образом благодаря екзергоничому процесса таутомеризации . Около половины энергии (30,5 кДж / моль), выделяющегося при гидролизе ФЭП (61,9 кДж / моль), используется на субстратное фосфорилирование, остальные (31,5 кДж / моль) служит как движущая сила, толкающая реакцию в сторону образования пирувата и АТФ . Реакция является необратимой за клеточных условий .


4. Суммарный выход гликолиза

Изменение свободной энергии в реакциях гликолиза в эритроцитах
Реакция ΔG 0
(КДж / моль)
ΔG
(КДж / моль)
Глюкоза + АТФ → глюкозо-6-фосфат + АДФ -16,7 -33,4
Глюкозо-6-фосфат ↔ фруктозо-6-фосфат 1,7 от 0 до 25
Фруктозо-6-фосфат + АТФ → фруктозо-1 ,6-бисфосфат + АДФ -14,2 -22,2
Фруктозо-1 ,6-бисфосфат ↔ глицеральдегид-3-фосфат + дигидроксиацетонфосфат 28,3 от -6 до 0
Дигидроксиацетонфосфат ↔ глицеральдегид-3-фосфат 7,5 от 0 до 4
Глицеральдегид-3-фосфат + Ф н + НАД + ↔ 1,3-бисфосфоглицерат + НАДH + H + 6,3 от -2 до 2
1,3-бисфосфоглицерат + АДФ ↔ 3-фосфоглицерат + АТФ -18,8 от 0 до 2
3-фосфоглицерат ↔ 2-фосфоглицерат 4,4 от 0 до 0,8
2-фосфоглицерат ↔ фосфоенолпируват + H 2 O 7,5 от 0 до 3,3
Фосфоенолпируват + АДФ → пируват + АТФ -31,4 -16,7
Желтым выделены реакции необратимые в реальных условиях клетки

Общее уравнение гликолиза имеет следующий вид:

Суммарное количество энергии, выделяемой в процессе расщепления глюкозы до пирувата составляет 146 кДж / моль , на синтез двух молекул АТФ расходуется 61 кДж / моль, остальные 85 кДж / моль энергии превращается в тепло .

При полном окислении глюкозы до углекислого газа и воды выделяется 2 840 кДж / моль , если сравнить это значение с общим выходом екзергоничних реакций гликолиза (146 кДж / моль), то становится понятно, что 95% энергии глюкозы остается "заключенной" в молекулах пирувата . Хотя реакции гликолиза являются универсальными почти для всех организмов, дальнейшая судьба его продуктов - пирувата и НАД Н - отличается у разных живых существ и зависит от условий.


5. Включение других углеводов в процесс гликолиза

Кроме глюкозы в процессе гликолиза превращается еще большое количество углеводов , важнейшими из которых являются полисахариды крахмал и гликоген , дисахариды сахароза , лактоза , мальтоза и трегалоза , а также моносахариды , такие как фруктоза , галактоза и манноза .


5.1. Полисахариды

С другой стороны, эндогенные полисахариды, откладываются про запас в клетках растений (крахмал) и животных и грибов (гликоген), включаются в гликолиз другим путем. Они подлежат не гидролиза, а фосфоролиза, который осуществляют фермента фосфорилазы крахмала и гликогенфосфорилаза соответственно. Они катализируют атаку фосфорной кислоты на гликозидной α1 → 4 Связь между последним и предпоследним остатками глюкозы с нередукуючого конца. Продуктом реакции является глюкозо-1-фосфат. Глюкозо-1-фосфат превращается фосфоглюкомутазы на глюкозо-6-фосфат, который является промежуточным метаболитом гликолиза. Механизм такого превращения похож на Изомеризацию 3-фосфоглицерату до 2-фосфоглицерат. Фосфоролиза внутриклеточных полисахаридов выгоден тем, что позволяет сохранить часть энергии гликозидных связей благодаря образованию фосфорилированного моносахарида. Таким образом экономится одна молекула АТФ на одну молекулу глюкозы .


5.2. Дисахариды


5.3. Моносахариды

У большинства организмов нет отдельных путей для утилизации фруктозы , галактозы и маннозы . Все они превращаются в фосфорилированные производные и вступают в процесс гликолиза. Фруктоза , что попадает в организм человека с фруктами и в результате расщепления сахарозы в большинстве тканей, кроме печени , например в мышцах и почках , фосфорилируется гексокиназой в фруктозо-6-фосфата с использованием одной молекулы АТФ . В печени она имеет другой путь превращения: сначала фруктокиназы переносит фосфатную группу на C-1 фруктозы, образованный фруктозо-1-фосфат расщепляется фруктозо-1-фосфатальдолаза до глицеральдегид и дигидроксиацетонфосфату. Обе триозы превращаются в глицеральдгед-3-фосфат: первый - под влиянием триозокиназа, второй - под влиянием гликолитического фермента триозофосфатизомеразы .

Набор таких свойств позволяет гексокиназы IV эффективно выполнять свою функцию: регулировать уровень глюкозы в крови. При обычных условиях, когда он не превышает нормы (4-5 мМ), гексокиназа неактивна, связана регуляторным белком в ядре и не может катализировать фосфорилирование. Вследствие этого печень не конкурирует с другими органами по глюкозу, а вновь в глюконеогенезе молекулы могут свободно выходить в кровь. Когда уровень глюкозы в крови возрастает, например после употребления пищи богатой углеводами, она быстро транспортируется GLUT2 в гептациты и вызывает диссоциацию глюкокиназы и регуляторного белка, после чего фермент может катализировать реакцию фосфорилирования .

Гексокиназа IV также регулируется на уровне биосинтеза белка , ее количество в клетке увеличивается, когда растут энергетические потребности, о чем может свидетельствовать низкая концентрация АТФ, высокая концентрация АМФ т.д..

Некоторые из модуляторов активности ФФК-1 влияют также на фермент фруктозо-1 ,6-бисфосфатазу, которая катализирует в глюконеогенезе реакцию превращения фруктозо-1 ,6-бисфосфат в фруктозо-6-фосфат, но противоположным образом: ее ингибирует АМФ и Ф-2 ,6-БФ. Итак активация гликолиза в клетке сопровождается угнетением глюконеогенеза и наоборот. Это необходимо для предотвращения лишним затратам энергии в так называемых сусбтартних циклах .


6.3. Пируваткиназа

У млекопитающих найдено как минимум три изоферменты пируваткиназы, что экспрессируются в различных тканях. Эти изоферменты имеют много общего, например все они подавляются высокими концентрациями ацетил-КоА, АТФ и длинноцепочечных жирными кислотами (показатели того, что клетка хорошо обеспечена энергией) , а также аланином (аминокислота, которая синтезируется из пирувата) . Фруктозо-1 ,6-бисфосфат активирует различные изоферменты пируваткиназы . Однако печеночная изоформа (пируваткиназа L) отличается от мышечной (пируваткиназы M) наличием еще одного способа регуляции - путем ковалентной модификации фосфатной группой. В ответ на низкий уровень глюкозы в крови поджелудочной железой выделяется глюкагон, активирующий цАМФ-зависимой протеинкиназы. Этот фермент фосфорилирует пируваткиназы L, вследствие чего последняя теряет свою активность. Итак гликолитического расщепления глюкозы в печени замедляется и ее могут использовать другие органы .


7. Гликолиз в раковых клетках

1928 Отто Варбург обнаружил, что в раковых клетках почти всех типов гликолиз и поглощения глюкозы происходит примерно в 10 раз интенсивнее, чем у здоровых, даже в присутствии больших концентраций кислорода. Эффект Варбурга стал основой для разработки нескольких методов выявления и лечения рака .

Все раковые клетки, по крайней мере на начальных этапах развития опухоли растут в условиях гипоксии , т.е. недостатка кислорода, из-за отсутствия сетки капилляров . Если они расположены на расстоянии более 100-200 мкм от ближайшей кровеносного сосуда, то должны полагаться только на гликолиз без дальнейшего окисления пирувата для получения АТФ. Йомвирно, что почти во всех раковых клетках в процессе злокачественной трансформации происходят следующие изменения: переход на получение энергии только путем гликолиза и приспособления к условиям повышенной кислотности , возникающие вследствие выделения молочной кислоты в межклеточную жидкость . Чем более агрессивная опухоль, тем быстрее в ней происходит гликолиз .

Приспособления раковых клеток к недостатку кислорода во многом происходит благодаря транскрипционных факторов индуцированном гипоксией (англ. hypoxia-inducible transcription factor, HIF-1 ), Который стимулирует повышение экспрессии как минимум восьми генов гликолитических ферментов, а также транспортеров глюкозы GLUT1 и GLUT3, активность которых не зависит от инсулина. Еще одним ефекторм HIF-1 является выделение клетками васкулярного эндотелиального фактора роста (англ. vascular endothelial growth factor ), Что стимулирует образование кровеносных сосудов в опухоли . HIF-1 также выделяется мышцами во время тренировок, предусматривающие большую интенсивность нагрузки, в этом случае он имеет аналогичный эффект: усиливает способность к анаэробного синтеза АТФ и стимулирует рост капилляров .

В некоторых случаях повышенная интенсивность гликолиза может быть использована для нахождения местоположения опухоли в организме с помощью позитрон-эмиссионной томографии (ПЭТ). Пациенту в кровь вводят аналог глюкозы 2-флюоро-2-дезоксиглюкозу (ФДГ), меченый изотопом 18 F. Это вещество поглощается клетками и является субстратом для первого фермента гликолиза - гексокиназы, однако не может быть преобразована фосфоглюкоизмеразою, поэтому накапливается в цитоплазме. Скорость накопления зависит от интенсивности захвата аналога глюкозы и его фосфорилирования, оба процесса значительно быстрее происходят в раковых клетках, чем у здоровых. При распаде..

  • Губский Ю.И. Биологическая химия. - С. 191. - Киев-Одесса: Новая книга, 2007. ISBN 978-966-382-017-0 .
  • Что изучает биохимия? Гликолиз - это серьезный ферментативный процесс распада глюкозы, который протекает в тканях животных и человека без использования кислорода. Именно он рассматривается биохимиками как способ получения молочной кислоты и молекул АТФ.

    Определение

    Что собой представляет аэробный гликолиз? Биохимия рассматривает этот процесс в качестве единственного процесса, характерного для живых организмов, который поставляет энергию.

    Именно помощью такого процесса организм животных и человека способен на протяжении определенного промежутка времени выполнять некоторые физиологически функции в условиях недостаточного количества кислорода.

    Если процесс расщепления глюкозы осуществляется с участием кислорода, протекает аэробный гликолиз.

    Какова его биохимия? Гликолиз считают первой стадией процесса до воды и углекислоты.

    Страницы истории

    Термин «гликолиз» был использован Лепиным в конце девятнадцатого века для процесса уменьшения глюкозы в крови, которая была изъята из кровеносной системы. У некоторых микроорганизмов протекают процессы брожения, которые аналогичны гликолизу. Для подобного превращения используется одиннадцать ферментов, причем большая их часть выделяется в гомогенном, высокоочищенном либо кристаллическом виде, их свойства хорошо изучены. Протекает данный процесс в гиалоплазме клетки.

    Специфика процесса

    Как протекает гликолиз? Биохимия - это наука, в которой данный процесс рассматривается как многостадийная реакция.

    Первая ферментативная реакция гликолиза, фосфорилирование, связана с переносом на глюкозу молекулами АТФ ортофосфата. В качестве катализатора в этом процессе выступает фермент гексокиназа.

    Получение глюкозо-6-фосфата в данном процессе объясняется высвобождением существенного количества энергии системы, то есть протекает необратимый химический процесс.

    Такой фермент, как гексокиназа, выступает катализатором процесса фосфорилирования не только самой D-глюкозы, но и D-маннозы, D-фруктозы. Помимо гексокиназы, в печени есть еще один фермент - глюкокиназа, катализирующий процесс фосфорилирования одной D-глюкозы.

    Второй этап

    Как объясняет вторую стадию данного процесса современная биохимия? Гликолиз на этом этапе представляет собой переход глюкозо-6-фосфата под воздействием гексозофосфатизомеразы в новое вещество - фруктозо-6-фосфат.

    Процесс протекает в двух взаимно обратных направлениях, не требует кофакторов.

    Третья стадия

    Она связана с фосфорилированием образующегося фруктозо-6-фосфата с помощью молекул АТФ. Ускорителем такого процесса является фермент фосфофруктокиназа. Реакция считается необратимой, она происходит в присутствии катионов магния, считается медленно протекающей стадией этого взаимодействия. Именно она является основой для определения скорости гликолиза.

    Фосфофруктокиназа - это один из представителей аллостерических ферментов. Она ингибируется молекулами АТФ, стимулируют ее АМФ и АДФ. В случае диабета, во время голодания, а также во многих других состояниях, при которых в больших количествах расходуются жиры, содержание цитрата в клетках тканей возрастает в несколько раз. В подобных условиях наблюдается существенное торможение полноценной деятельности фосфофруктокиназы цитратом.

    Если отношение АТФ к АДФ достигает существенных значений, происходит угнетение фосфофруктокиназы, что способствует замедлению гликолиза.

    Как можно увеличить гликолиз? Биохимия предлагает для этого снижать коэффициент интенсивности. Например, в нефункционирующей мышце невысокая активность фосфофруктокиназы, а вот концентрация АТФ возрастает.

    При работе мышцы наблюдается значительное использование АТФ, что вызывает повышение уровня фермента, вызывает ускорение процесса гликолиза.

    Четвертый этап

    Катализатором этой части гликолиза является фермент альдолаза. Благодаря ему происходит обратимое расщепление вещества на две фосфотриозы. В зависимости от значения температуры происходит установление равновесия на разном уровне.

    Как поясняет происходящее биохимия? Гликолиз при повышении температуры протекает в сторону прямой реакции, продуктом которой является глицеральдегид-3-фосфата и диоксиацетонфосфат.

    Остальные стадии

    Пятым этапом считают процесс изомеризации триозофосфатов. Катализатором процесса является фермент триозофосфатизомераза.

    Шестая реакция в суммарном виде описывает получение 1,3-дифосфорглицериновой кислоты в присутствии в качестве акцептора водорода фосфата НАД. Именно этот неорганический агент отщепляет водород от глицеральдегда. Получаемая связь непрочная, но она богата энергией, а при расщеплении получают 1,3-дифосфоглицериноваую кислоту.

    Седьмая стадия катализируется фосфоглицераткиназой, предполагает передачу энергии фосфатным остатком на АДФ с образованием 3-фосфоглицериновой кислоты и АТФ.

    В восьмой реакции идет внутримолекулярный перенос фосфатной группы, при этом наблюдается превращение 3-фосфоглицериновой кислоты в 2-фосфоглицерат. Процесс обратимый, поэтому для его осуществления используют катионы магния.

    Кофактором фермента на этом этапе выступает 2,3-дифосфоглицериновая кислота.

    Девятая реакция предполагает переход 2-фосфоглицериновой кислоты в фосфоенолпируват. Ускорителем этого процесса выступает фермент енолаза, которая активируется катионами магния, а ингибитором в этом случае выступает фторид.

    Десятая реакция идет с разрывом связи и переводом энергии фосфатного остатка на АДФ с фосфоенолпировиноградной кислоты.

    Одиннадцатая стадия связана с восстановлением пировиноградной кислоты, получением молочной кислоты. Для осуществления этого превращения необходимо участие фермента лактатдегидрогеназы.

    Как можно в общем виде записать гликолиз? Реакции, биохимия которых была рассмотрена выше, сводится к гликолитической оксидоредукции, сопровождающейся образованием молекул АТФ.

    Значение процесса

    Мы рассмотрели, как описывает биохимия гликолиз (реакции). Биологическое значение данного процесса состоит в получении фосфатных соединений, обладающих большим запасом энергии. Если на первом этапе затрачиваются две молекулы АТФ, то этап связан с образованием четырех молекул данного соединения.

    Какова его биохимия? Гликолиз и глюконеогенез имеют энергетическую эффективность: на 2 молекулы АТФ приходится 1 молекула глюкозы. Изменение энергии при образовании из глюкозы двух молекул кислоты составляет 210 кДж/моль. 126 кДж уходит в виде тепла, 84 кДж скапливается в фосфатных связях АТФ. Концевая связь обладает значением энергии 42 кДж/моль. Подобными расчетами занимается и биохимия. Гликолиз аэробный и анаэробный имеют коэффициент полезного действия 0,4.

    В результате многочисленных экспериментов удалось установить точные значения каждой реакции гликолиза, протекающей в интактных эритроцитах человека. Восемь реакций гликолиза близки к термодинамическому равновесию, три процесса связаны с существенным снижением величины свободной энергии, считаются необратимыми.

    Что такое глюконеогенез? Биохимия процесса заключается в расщеплении углевода, протекающем в несколько стадий. Контроль за каждым этапом осуществляется ферментами. Например, в тканях, для которых характерен аэробный метаболизм (ткани сердца, почек), он регулируется изоферментами ЛДГ1 и ЛДГ2. Они ингибируются незначительными количествами пирувата, в результате чего не допускается синтез молочной кислоты, достигается полное окисление ацетил-КоА в цикле трикарбоновых кислот.

    Чем еще характеризуется анаэробный гликолиз? Биохимия, например, подразумевает включение в процесс иных углеводов.

    В результате лабораторных исследований удалось установить, что около 80 % фруктозы, которая попадает в человеческий организм вместе с пищей, подвергается метаболизму в печени. Здесь происходит процесс фосфорилирования ее до фруктозо-6-фосфата, катализатором этого процесса выступает фермент гексокиназа.

    Ингибируется этот процесс соединение через несколько стадий превращается в глюкозу, сопровождается отщеплением фосфорной кислоты. Кроме того, возможны и последующие его превращения в другие фосфорсодержащие органические соединения.

    Под воздействием АТФ и фосфофруктокиназы из фруктозо-6-фосфата будет получаться фруктозо-1,6-дифосфат.

    Затем это вещество метаболизируется по стадиям, характерным для гликолиза. В мышцах и печени есть кетогексокиназа, способная ускорять процесс фосфорилирования фруктозы в ее фосфорсодержащее соединение. Процесс не блокируется глюкозой, а получающийся фруктозо-1-фосфат распадается под воздействием кетозо-1-фосфатальдолазы на глицеральдегид и дигидроксиацетонфосфат. D-глицеральдегид под воздействием триозокиназы вступает в фосфорилирование, в конечном итоге выделяются молекулы АТФ и получается дигидроксиацетонфосфат.

    Врожденные аномалии

    Биохимикам удалось выявить некоторые врожденные аномалии, связанные с обменом фруктозы. Данное явление (эссенциальная фруктозурия) связана с биологическим недостатком содержания в организме фермента кетогексокиназы, поэтому все процессы расщепления этого углевода тормозятся глюкозой. Следствием такого нарушения является накапливание в крови фруктозы. Для фруктозы почечный порог низкий, поэтому фруктозурию удается обнаруживать при концентрациях углевода в крови около 0,73 ммоль/л.

    Участие в биосинтезе галактозы

    Галактоза поступает в организм вместе с пищей, расщепляющейся в пищеварительном тракте до глюкозы и галактозы. Сначала этот углевод превращается в галактозо-1-фосфат, катализатором процесса выступает галактокиназа. Далее происходит превращение в глюкозо-1-фосфат. На этом этапе также образуется уридиндифосфогалактоза и УДФ-глюкоза. Последующие стадии процесса протекают по схеме, аналогичной расщеплению глюкозы.

    Помимо этого пути метаболизма галактозы, возможна и вторая схема. Сначала также образуется галактозо-1-фосфат, но последующие этапы связаны с образованием молекул УТФ и глюкозо-1-фосфата.

    Среди многочисленных патологических состояний, связанных с углеводным обменом, особое место занимает галактоземия. Это явление связано с рецессивно наследуемым заболеванием, при котором содержание в крови сахара повышается из-за галактозы и достигает 16,6 ммоль/л. При этом практически не происходит изменения содержания в крови глюкозы. Помимо галактозы, в таких случаях накапливается в крови и галактозо-1-фосфат. Дети, у которых выявлена галактоземия, имеют умственную отсталость, а также есть катаракту.

    По мере роста нарушения углеводного обмена снижаются, причиной является протекание расщепления галактозы по второму пути. Благодаря тому, что биохимикам удалось выяснить суть происходящего процесса, появилась возможность бороться с проблемами, касающимися неполного расщепления глюкозы в организме.

    В аэробном гликолизе можно выделить 2 этапа.

      Подготовительный этап, в ходе которого глюкоза фосфорилируется и расщепляется на две молекулы фосфотриоз. Эта серия реакций протекает с использованием 2 молекул АТФ.

      Этап, сопряжённый с синтезом АТФ. В результате этой серии реакций фосфотриозы превращаются в пируват. Энергия, высвобождающаяся на этом этапе, используется для синтеза 10 моль АТФ.

    2. Реакции аэробного гликолиза

    Превращение глюкозо-6-фосфата в 2 молекулы глицеральдегид-3-фосфата

    Глюкозо-6-фосфат, образованный в результате фосфорилирования глюкозы с участием АТФ, в ходе следующей реакции превращается в фруктозо-6-фосфат. Эта обратимая реакция изомеризации протекает под действием фермента глюкозофосфатизомеразы.

    Затем следует ещё одна реакция фосфорилирования с использованием фосфатного остатка и энергии АТФ. В ходе этой реакции, катализируемой фосфофруктокиназой, фруктозо-6-фосфат превращается в фруктозо-1,6-бисфосфат. Данная реакция, так же, как гексокиназная, практически необратима, и, кроме того, она наиболее медленная из всех реакций гликолиза. Реакция, катализируемая фосфофруктокиназой, определяет скорость всего гликолиза, поэтому, регулируя активность фосфофруктокиназы, можно изменять скорость катаболизма глюкозы.

    Фруктозо-1,6-бисфосфат далее расщепляется на 2 триозофосфата: глицеральдегид-3-фосфат и дигидроксиацетонфосфат. Реакцию катализирует фермент фруктозобисфосфатальдолаза, или просто альдолаза. Этот фермент катализирует как реакцию альдольного расщепления, так и альдольной

    Рис. 7-34. Пути катаболизма глюкозы. 1 - аэробный гликолиз; 2, 3 - общий путь катаболизма; 4 - аэробный распад глюкозы; 5 - анаэробный распад глюкозы (в рамке); 2 (в кружке) - стехиометрический коэффициент.

    Рис. 7-35. Превращение глюкозо-6-фосфата в триозофосфаты.

    конденсации, т.е. обратимую реакцию. Продукты реакции альдольного расщепления - изомеры. В последующих реакциях гликолиза используется только глицеральдегид-3-фосфат, поэтому дигидроксиацетонфосфат превращается с участием фермента триозофосфатизомеразы в глицероальдегид-3-фосфат (рис. 7-35).

    В описанной серии реакций дважды происходит фосфорилирование с использованием АТФ. Однако расходование двух молекул АТФ (на одну молекулу глюкозы) далее будет компенсировано синтезом большего количества АТФ.

    Превращение глицеральдегид-3-фосфата в пируват

    Эта часть аэробного гликолиза включает реакции, связанные с синтезом АТФ. Наиболее сложной в данной серии реакций является реакция превращения глицеральдегид-3-фосфата в 1,3-бисфосфоглицерат. Это превращение - первая реакция окисления в ходе гликолиза. Реакцию катализирует глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, которая является NAD-зависимым ферментом. Значение данной реакции заключается не только в том, что образуется восстановленный кофермент, окисление которого в дыхательной цепи сопряжено с синтезом АТФ, но также и в том, что свободная энергия окисления концентрируется в макроэргической связи продукта реакции. Глицеральдегид- 3 -фосфатдегидрогеназа содержит в активном центре остаток цистеина, сульфгидрильная группа которого принимает непосредственное участие в катализе. Окисление глицеральдегид-3-фосфата приводит к восстановлению NAD и образованию с участием Н3РО4 высокоэнергетической ангидридной связи в 1,3-бисфосфоглицерате в положении 1. В следующей реакции высокоэнергетический фосфат передаётся на АДФ с образованием АТФ. Фермент, катализирующий это превращение, назван по обратной реакции фосфоглицераткиназой (киназы называются по субстрату, находящемуся в уравнении реакции по одну сторону с АТФ). Данная серия реакций показана на рис. 7-36.

    Образование АТФ описанным способом не связано с дыхательной цепью, и его называют субстратным фосфорилированием АДФ. Образованный 3-фосфоглицерат уже не содержит макроэргической связи. В следующих реакциях происходят внутримолекулярные перестройки, смысл которых сводится к тому, что низкоэнергетический

    Рис. 7-36. Превращение глицеральдегид-3-фосфата в 3-фосфоглицерат.

    фосфоэфир переходит в соединение, содержащее высокоэнергетический фосфат. Внутримолекулярные преобразования заключаются в переносе фосфатного остатка из положения 3 в фосфоглицерате в положение 2. Затем от образовавшегося 2-фосфоглицерата отщепляется молекула воды при участии фермента енолазы. Название дегидратирующего фермента дано по обратной реакции. В результате реакции образуется замещённый енол - фосфоенолпируват. Образованный фосфоенолпируват - макроэргическое соединение, фосфатная группа которого переносится в следующей реакции на АДФ при участии пируваткиназы (фермент также назван по обратной реакции, в которой происходит фосфорилирование пирувата, хотя подобная реакция в таком виде не имеет места).

    Превращение фосфоенолпирувата в пируват - необратимая реакция. Это вторая в ходе гликолиза реакция субстратного фосфорилирования. Образующаяся енольная форма пирувата затем неферментативно переходит в более термодинамически стабильную кетофор-му. Описанная серия реакций представлена на рис. 7-37.

    Рис. 7-37. Превращение 3-фосфоглицерата в пируват.

    Схема 10 реакций, протекающих при аэробном гликолизе, и дальнейшее окисление пирувата представлены на рис. 7-33.

    Фотосинтез - это процесс преобразования лучистой энергии в химическую с использованием последней в синтезе углеводов из углекислого газа. Сум­марное уравнение фотосинтеза:

    Процесс этот эндергонический и требует значительного количества энергии Поэтому суммарный процесс фотосинтеза складывается из двух стадий, кото­рые принято называть световой (или энергетической) и темповой (или мета­болической). В хлоропласте эти стадии пространственно разобщены - свето­вая осуществляется в квантосомах мембран тилактоидов, а темновая-вне тилактоидов, в водной среде стромы. Взаимосвязь между световой и темновой стадиями можно выразить схемой

    Световая стадия протекает на свету. Энергия света трансформируется на-этой стадии в химическую энергию АТФ, а бедные энергией электроны воды пере­ходят в богатые энергией электроны НАДФ Н г _ Побочным веществом, обра­зующимся в ходе световой стадии, является кислород. Богатые энергией продукты световой стадии АТФ и НАДФ * Н г используются в следующей ста­дии, которая может проходить в темноте. В темновой стадии наблюдается восстановительный синтез глюкозы из СОг. Без световой стадии темновая невозможна.

    Механизм световой (фотохимической) стадии фотосинтеза

    В мембранах тилактоидов имеются два фотохимических центра, или фото­системы, которые обозначаются как фотосистемы I и II (рис. 46). Каждая из фотосистем не может заменить друг друга, ибо функции их различны В состав фотосистем входят различные пигменты: зеленые - хлорофиллы а и Ь, желтые - каротиноиды и красные или синие - фикобилины. Фотохимически активен среди этого комплекса пигментов только хлорофилл с. Остальные пигменты играют вспомогательную роль, являясь лишь собирателями световых квантов (своеобразные светособирающие линзы) н проводниками их к фото­химическому центру. Функцию фотохимических центров выполняют особые формы хлорофилла а, а именно: в фотосистеме I -пигмент 700 (Р 70 о), погло­щающий свет с длиной волны около 700 нм, в фотосистеме II - пигмент 680 (Р 680), поглощающий свет с длнной волны 680 нм. На 300-400 молекул светособирающих пигментов в фотосистемах I и II приходится только одна молекула фотохимически активного пигмента - хлорофилла а. Поглощение световых квантов фотосистемой I переводит нигмент Р 700 из основного состояния в возбужденное - Р*оо, в котором он легко теряет электрон. Потеря элек­трона вызывает образование электронной дырки в виде Р^,

    Электроиная дырка способна легко заполняться электроном.

    Итак, поглощение световых квантов фотосистемой I приводит к разделе­нию зарядов: положительного в виде электронной дырки (Р^о) и отрицатель­но заряженного электрона, который сначала акцептируется специальными железосерными белками (FeS-центр), а затем или транспортируется но одной из цепей переносчиков обратно к Р^н, заполняя электронную дырку, или по другой цепи переносчиков через ферредоксин и флавопротеид к постоянному акцептору - НАДФ Н я. В первом случае происходит замкнутый циклический транспорт электрона/а во втором -нециклический. Возвращение возбужден­ных электронов иа Рщщ связано с освобождением энергии (при переходе с вы­сокого на низкий энергетический уровень), которая аккумулируется-в фосфат­ных связях АТФ. Этот процесс называется фотофосфорилированием; при циклическом переносе происходит циклическое фотофосфорилирование, при нециклическом - соответственно нециклическое. В тнлактоидах идут оба про­цесса, хотя второй более сложный. Он сопряжен с работой.фотосистемы И.

    Поглощение световых квантов фотосистемой II вызывает разложение (фотоокисление) воды в фотохимическом центре Р^по схеме

    Фотолиз воды называется реакцией Хилла. Электроны, образующиеся прн разложении воды, первоначально акцептируются веществом, обозначаемым Q (иногда его называют цитохромом С БМ по максимуму поглощения, хотя оно не является цитохромом). Затем от вещества Q через цепь переносчиков, похожую по составу на митохондрнальную, электроны направляются к Pf 00 , заполняя электронную дырку.

    Следовательно, утраченные Р 700 электроны восполняются за счет электро­нов воды, разлагаемой под действием света в фотосистеме II. Нециклический поток электронов от Н г О к НАДФ ■ Н г, происходящий при взаимодействии двух фотосистем и связывающих их электронно-транспортных цепей, наблюда­ется вопреки значениям редокс-потенциалов: Е° для / г О г /Н г О= +0,81 В. а Е" для НАДФ/НАДФ Н= -0,32 В. Энергия света обращает поток элек­тронов «вспять». Существенно то, что при переносе от фитисжмёмы II к фото­системе I часть энергии электронов аккумулируется в виде протонного по­тенциала на мембране тилактоидов, а затем в энергию АТФ.

    Механизм образования протонного потенциала в цепи переноса электро­нов и его использование на образование АТФ в хлоропластах сходен с тако­вым в митохондриях. Однако в механизме фотофосфорилирования имеются некоторые особенности. Тилактоиды представляют собой как бы вывернутые наизнанку митохондрии, поэтому направление переноса электронов и протонов через мембрану противоположно направлению его в митохондриальной мембране (рис. 47). Электроны движутся к внешней стороне, а протоны концентрируются внутри тнлактоидного матрикса. Матрикс заряжается поло­жительно, а внешняя мембрана тилактоида - отрицательно, т. е. направление протонного градиента противоположно направлению его в митохондриях. Другой особенностью является значительно большая доля рН в протонном потенциале по сравнению с митохондриями. Тилактоидный матрикс сильно закисляется, поэтому ДрН может достигать 0,1-0,2 В, в то время как Дф со­ставляет около 0,1 В. Общее значение Др н + >0,25 В.

    Н*-АТФ-синтетаза, обозначаемая в хлоропластах как комплекс «CF, + F 0 », ориентирована тоже в противоположном направлении. Головка ее (F,) смот­рит наружу, в сторону стромы хлоропласта. Протоны выталкиваются через CF 0 +F t изматрикса наружу, и в активном центре F, образуется АТФ за счет энергии протонного потенциала.

    В отличие от мнтохондриальной цепи в тилактоидной имеется, по-видимо­му, только пня участка сопряжения, поэтому на синтез одной молекулы АТФ требуется вместо двух три протона, т.е. соотношение 3 Н + /1 моль АТФ.

    Механизм темновой стадии фотосинтеза

    Продукты световой стадии АТФ и НАДФ - Н а, находящиеся в строме хло­ропласта, используются здесь же для синтеза глюкозы из С0 2 . Ассимиляция диоксида углерода (фотохимическое Карбоксилирование) представляет собой циклический процесс, который называется также лентозофосфатным фотоснн-тетнческим циклом или циклом Кальвина (рис. 48). В нем можно выделить три основные фазы: !

    1) фиксация С0 2 рибулозодифосфатом;

    2) образование триозофосфатов при восстановленин 3-фосфогл | ицерата;

    3) регенерация рибулозодифосфата.

    Фиксация С0 2 рибулозодифосфатом катализируется ферментом рибуло-зодшросфаткарбоксилазой:

    Далее 3-фосфоглицерат восстанавливается с помощью НАДФ Н^и АТФ до глицеральдегнд-3-фосфата. Эта реакция катализируется ферментом - глице-ральдегид-3-фосфат-дегидрогеназой. Глицеральдегид-3-фосфат легко изоме-рнзуется в дигндроксн ацетон фосфат. Оба триозофосфата используются в об­разовании фруктозобнсфосфата (обратная реакция, катализируемая фрукто-зобисфосфат-альдолазой). Часть молекул образовавшегося фруктозобнсфос­фата участвует вместе с триозофосфатами в регенерации рибулозодифосфата (замыкают цикл), а другая часть используется для запасания углеводов в фо-тосинтезирующих клетках, как показано на схеме.

    Подсчитано, что для синтеза одной молекулы глюкозы из С0 2 в цикле Кальвина требуется 12 НАДФ Н + Н + и 18 АТФ (12 молекул АТФ расходу­ются на восстановление 3-фосфоглицерата, а 6 молекул - в реакциях регенера­ции рибулозодифосфата). Минимальное соотношение - 3 АТФ г 2 НАДФ-Н,

    Можно заметить общность принципов, лежащих в основе фотосинтетиче" ского и окислительного фосфорилирования, причем фотофосфорнл-ирование представляет собой как бы обращенное окислительное фосфорилирование:

    Энергия света является движущей силой фосфорилирования и синтеза органических веществ (S-Hj) при фотосинтезе и, наоборот, энергия окисле­ния органических веществ - при окислительном фосфорилировании. Поэтому именно растения обеспечивают жизнь животным и другим гетеротрофным организмам:

    Углеводы, образующиеся при фотосинтезе, служат для построения угле­родных скелетов многочисленных органических веществ растений. Азоторгани-ческие вещества усваиваются фотосинтезирующими организмами путем вос­становления неорганических нитратов или атмосферного азота, а сера - вос­становлением сульфатов до сульфгндрильных групп аминокислот. Фотосинтез в конечном итоге обеспечивает построение не только обязательных для жизни белков, нуклеиновых кислот, углеводов, липидов, кофакторов, но и многочис­ленных продуктов вторичного синтеза, являющихся ценными лекарственными веществами (алкалоиды, флавоноиды, полифенолы, терпены, стероиды, орга­нические кислоты и т.д.).

    Билет 48-другой вариант

    Фотосинтез (от греч. φωτο- - свет и σύνθεσις - синтез, совмещение, помещение вместе) - процесс образования органических веществ из углекислого газа и воды на свету при участии фотосинтетических пигментов (хлорофилл урастений, бактериохлорофилл и бактериородопсин у бактерий). В современной физиологии растений под фотосинтезом чаще понимается фотоавтотрофная функция - совокупность процессов поглощения, превращения и использования энергии квантов света в различных эндэргонических реакциях, в том числе превращения углекислого газа ворганические вещества.

    Световая (светозависимая) стадия

    В ходе световой стадии фотосинтеза образуются высокоэнергетические продукты: АТФ, служащий в клетке источником энергии, и НАДФН, использующийся как восстановитель. В качестве побочного продукта выделяется кислород. В общем роль световых реакций фотосинтеза заключается в том, что в световую фазу синтезируются молекула АТФ и молекулы-переносчики протонов, то есть НАДФ Н 2 .

    Фотохимическая суть процесса

    Хлорофилл имеет два уровня возбуждения (с этим связано наличие двух максимумов на спектре его поглощения): первый связан с переходом на более высокийэнергетический уровень электрона системы сопряжённых двойных связей, второй - с возбуждением неспаренных электронов азота и магния порфиринового ядра. При неизменном спине электрона формируются синглетные первое и второе возбуждённое состояние, при изменённом - триплетное первое и второе.

    Второе возбуждённое состояние наиболее высокоэнергетично, нестабильно и хлорофилл за 10 -12 сек переходит с него на первое, с потерей 100 кДж/моль энергии только в виде теплоты. Из первого синглетного и триплетного состояний молекула может переходить в основное с выделением энергии в виде света (флуоресценция ифосфоресценция соответственно) или тепла, с переносом энергии на другую молекулу, либо, поскольку электрон на высоком энергетическом уровне слабо связан с ядром, с переносом электрона на другое соединение.

    Первая возможность реализуется в светособирающих комплексах, вторая - в реакционных центрах, где переходящий в возбужденное состояние под воздействием кванта света хлорофилл становится донором электрона (восстановителем) и передаёт его на первичный акцептор. Чтобы предотвратить возвращение электрона на положительно заряженный хлорофилл, первичный акцептор передаёт его вторичному. Кроме того, время жизни полученных соединений выше чем у возбуждённой молекулы хлорофилла. Происходит стабилизация энергии и разделения зарядов. Для дальнейшей стабилизации вторичный донор электронов восстанавливает положительно заряженный хлорофилл, первичным донором же является в случае оксигенного фотосинтеза вода.

    Проблемой, с которой сталкиваются при этом проводящие оксигенный фотосинтез организмы, является различие окислительно-восстановительных потенциалов воды (для полуреакции H 2 O → O 2 (E 0 =+0,82 В) и НАДФ + (E 0 =-0,32 В). Хлорофилл при этом должен иметь в основном состоянии потенциал больший +0,82 В чтобы окислять воду, но при этом иметь в возбуждённом состоянии потенциал меньший чем −0,32 В чтобы восстанавливать НАДФ + . Одна молекула хлорофилла не может отвечать обоим требованиям. Поэтому сформировалось две фотосистемы и для полного проведения процесса необходимо два кванта света и два хлорофилла разных типов.

    Светособирающие комплексы

    Хлорофилл выполняет две функции: поглощения и передачи энергии. Более 90 % всего хлорофилла хлоропластов входит в состав светособирающих комплексов (ССК), выполняющих роль антенны, передающей энергию к реакционному центру фотосистем I или II. Помимо хлорофилла в ССК имеются каротиноиды, а у некоторых водорослейи цианобактерий - фикобилины, роль которых заключается в поглощении света тех длин волн, которые хлорофилл поглощает сравнительно слабо.

    Передача энергии идёт резонансным путём (механизм Фёрстера) и занимает для одной пары молекул 10 −10 -10 −12 с, расстояние на которое осуществляется перенос составляет около 1 нм. Передача сопровождается некоторыми потерями энергии (10 % от хлорофилла a к хлорофиллу b, 60 % от каротиноидов к хлорофиллу), из-за чего возможна только от пигмента с максимумом поглощения при меньшей длине волны к пигменту с большей. Именно в таком порядке взаимно локализуются пигменты ССК, причём наиболее длинноволновые хлорофиллы находятся в реакционных центрах. Обратный переход энергии невозможен.

    ССК растений расположен в мембранах тилакоидов, у цианобактерий основная его часть вынесена за пределы мембран в прикреплённые к ним фикобилисомы - палочковидные полипептидно-пигментные комплексы, в которых находятся различные фикобилины: на периферии фикоэритрины (с максимумом поглощения при 495-565 нм), за ними фикоцианины (550-615 нм) и аллофикоцианины (610-670 нм), последовательно передающие энергию на хлорофилл a (680-700 нм) реакционного центра.

    Основные компоненты электронтранспортной цепи

    Фотосистема II

    Фотосистема - совокупность ССК, фотохимического реакционного центра и переносчиков электрона. Светособирающий комплекс II содержит 200 молекул хлорофилла a, 100 молекул хлорофилла b, 50 молекул каротиноидов и 2 молекулы феофитина. Реакционный центр фотосистемы II представляет собой пигмент-белковый комплекс, расположенный в тилакоидных мембранах и окружённый ССК. В нём находится димер хлорофилла a с максимумом поглощения при 680 нм (П680). На него в конечном счёте передаётся энергия кванта света из ССК, в результате чего один из электронов переходит на более высокое энергетическое состояние, связь его с ядром ослабляется и возбуждённая молекула П680 становится сильным восстановителем (E 0 =-0,7 В).

    П680 восстанавливает феофитин, в дальнейшем электрон переносится на хиноны, входящие в состав ФС II и далее на пластохиноны, транспортируемые в восстановленной форме к b 6 f комплексу. Одна молекула пластохинона переносит 2 электрона и 2 протона, которые берутся из стромы.

    Заполнение электронной вакансии в молекуле П680 происходит за счёт воды. В состав ФС II входит водоокисляющий комплекс , содержащий в активном центре ионымарганца в количестве 4 штук. Для образования одной молекулы кислорода требуется две молекулы воды, дающие 4 электрона. Поэтому процесс проводится в 4 такта и для его полного осуществления требуется 4 кванта света. Комплекс находится со стороны внутритилакоидного пространства и полученные 4 протона выбрасываются в него.

    Таким образом, суммарный результат работы ФС II - это окисление 2 молекул воды с помощью 4 квантов света с образованием 4 протонов во внутритилакоидном пространстве и 2 восстановленных пластохинонов в мембране.

    b 6 f или b/f-комплекс

    b 6 f комплекс является насосом, перекачивающим протоны из стромы во внутритилакоидное пространство и создающий градиент их концентрации за счёт выделяющейся в окислительно-восстановительных реакциях электронтранспортной цепи энергии. 2 пластохинона дают перекачку 4 протонов. В дальнейшем трансмембранный протонный градиент (pH стромы около 8, внутритилакоидного пространства - 5) используется для синтеза АТФ трансмембранным ферментом АТФ-синтазой.

    Фотосистема I

    Светособирающий комплекс I содержит примерно 200 молекул хлорофилла.

    В реакционном центре первой фотосистемы находится димер хлорофилла a с максимумом поглощения при 700 нм (П700). После возбуждения квантом света он восстанавливает первичный акцептор - хлорофилл a, тот - вторичный (витамин K 1 или филлохинон), после чего электрон передаётся на ферредоксин, который и восстанавливает НАДФ с помощью фермента ферредоксин-НАДФ-редуктазы.

    Белок пластоцианин, восстановленный в b 6 f комплексе, транспортируется к реакционному центру первой фотосистемы со стороны внутритилакоидного пространства и передаёт электрон на окисленный П700.

    Циклический и псевдоциклический транспорт электрона

    Помимо полного нециклического пути электрона, описанного выше, обнаружены циклический и псевдоциклический.

    Суть циклического пути заключается в том, что ферредоксин вместо НАДФ восстанавливает пластохинон, который переносит его назад на b 6 f комплекс. В результате образуется больший протонный градиент и больше АТФ, но не возникает НАДФН.

    При псевдоциклическом пути ферредоксин восстанавливает кислород, который в дальнейшем превращается в воду и может быть использован в фотосистеме II. При этом также не образуется НАДФН.

    Темновая стадия

    В темновой стадии с участием АТФ и НАДФН происходит восстановление CO 2 до глюкозы (C 6 H 12 O 6). Хотя свет не требуется для осуществления данного процесса, он участвует в его регуляции.

    С 3 -фотосинтез, цикл Кальвина

    Цикл Кальвина или восстановительный пентозофосфатный цикл состоит из трёх стадий:

      карбоксилирования;

      восстановления;

      регенерация акцептора CO 2 .

    На первой стадии к рибулозо-1,5-бифосфату присоединяется CO 2 под действием фермента рибулозобисфосфат-карбоксилаза/оксигеназа. Этот белок составляет основную фракцию белков хлоропласта и предположительно наиболее распространённый фермент в природе. В результате образуется промежуточное неустойчивое соединение, распадающееся на две молекулы 3-фосфоглицериновой кислоты (ФГК).

    Во второй стадии ФГК в два этапа восстанавливается. Сначала она фосфорилируется АТФ под действием фосфороглицерокиназы с образованием 1,3-дифосфоглицериновой кислоты (ДФГК), затем при воздействии триозофосфатдегидрогеназы и НАДФН ацил-фосфатная группа ДФГК дефосфорилируется и восстанавливается до альдегидной и образуется глицеральдегид-3-фосфат - фосфорилированный углевод (ФГА).

    В третьей стадии участвуют 5 молекул ФГА, которые через образование 4-, 5-, 6- и 7-углеродных соединений объединяются в 3 5-углеродных рибулозо-1,5-бифосфата, для чего необходимы 3АТФ.

    Наконец, две ФГА необходимы для синтеза глюкозы. Для образования одной её молекулы требуется 6 оборотов цикла, 6 CO 2 , 12 НАДФН и 18 АТФ.

    Продукты питания, которые использует человек, чрезвычайно разнообразны. Основная часть продуктов питания имеет биологическое происхожде­ние (растительные и животные продукты) и меньшая часть небиологи­ческое (вода и растворенные в ней минеральные соли). Поскольку в биоло­гических объектах основная часть веществ находится в виде биополимеров, то основную массу пищи составляют высокомолекулярные компоненты, а не мономеры, В понятие «питательные вещества» входит группа основных компо­нентов пищи, которые обеспечивают необходимые энергетические и пластнческие потребности организма. К питательным веществам относятся шесть групп веществ: 1) белки; 2) углеводы; 3) липиды; 4) витамины (включая и вита-миноподобные вещества); 5) минеральные вещества; 6) вода.

    Кроме питательных веществ в пище содержится большая группа вспомо­гательных веществ, которые не имеют ни энергетического, ни пластического значения, но определяют вкусовые и другие качества пищи, помогая распаду и всасыванию питательных веществ. Присутствие этих веществ обычно учиты­вается при разработке рационального питания.

    Белки. Биологическая ценность белков животного и растительного про­исхождения определяется составом аминокислот, особенно незаменимых. Если в пищевых продуктах белки содержат все незаменимые аминокислоты, то эти белки относятся к полноценным. Остальные пищевые белки неполноценные. Растительные белки в отличие от животных как правило, менее полноценны. Существует международный «условный образец» состава белка, отвечающего потребностям организма. В этом белке 31,4% составляют незаменимые амино­кислоты; остальное - заменимые. Чтобы оценить состав любого пищевого белка, важно иметь эталон с необходимым содержанием незаменимых амино­кислот и наиболее физиологичным соотношением каждой из незаменимых ами­нокислот. В качестве эталона был приннт белок куриного яйца, наиболее от­вечающий физиологическим потребностям организма. Любые пищевые белки сравниваются по составу аминокислот с эталонным.

    Общая суточная потребность в белках взрослого человека составляет 80--100 г, из них половина должна быть животного происхождения.

    Углеводы. Биологическую ценность среди углеводов пиши имеют полиса хариды - крахмал и гликоген; днсахариды-сахароза, лактоза, трегалоза, мальтоза, изомальтоза. Лишь небольшая доля углеводов пищи приходится на моносахариды (глюкоза, фруктоза, пентозы и т. д.). Содержание моносаха­ридов в пище может возрасти после кулинарной или иной обработки пищевых продуктов. Основная функция углеводов - энергетическая, но они выполняют структурные и ряд других рассмотренных ранее функций, свойственных угле­водам (см. «Углеводы»). Углеводы, имеющие р-гликоэидные связи (целлюло­за, гемицеллюлозы и др.), не расщепляются, поэтому они играют вспомога­тельную роль в пищеварении, активируя механическую деятельность ки­шечника.

    Суточная потребность взрослого человека-в углеводах составляет 400- 500 г, из них около 400 г приходится на крахмал. Остальная часть - на днса­хариды, в основном на сахарозу.

    Липиды. Биологическую ценность для организма человека представляют в основном следующие компоненты пищи. Триацилглицерины, составляющие главную (по массе) часть липидов пищи. Они определяют энергетическое

    значение пищевых липидов, которые составляют от "/з Д° "А энергетической ценности пищи. Различные виды фосфолипидов, входящих в состав мембран клеток, поступают преимущественно с продуктами животного происхождения (мясные продукты, желток яиц, масло и т. д.), так же как и холестерин и его эфиры. Фосфолипиды и холестерин определяют пластическую функцию липи­дов пищи. С липидами пищи поступают незаменимые для организма жиро­растворимые витамины н витаминоподобные соединения.

    Суточная потребность в пищевых липидах составляет 80-100 г, из них не менее 20-25 г должно поступать растительных липидов, содержащих нена­сыщенные жирные кислоты.

    Витамины и витамнноподобные вещества поступают в организм с расти­тельными и животными продуктами. Кроме того, некоторые витамины синтези­руют* в организме кишечными бактериями (энтерогенные витамины). Одна­ко недоля значительно меньше пищевых. Витамины - абсолютно незамени­мые компоненты пищн, поскольку они используются для синтеза в клетках организма коферментов, являющихся обязательной частью сложных фер­ментов.

    Суточная потребность в отдельных витаминах колеблется от нескольких микрограммов до десятков н сотен миллиграммов.

    Минеральные вещества. Главным их источником служат небиологические компоненты пищи, т.е. растворенные в питьевой воде минеральные вещества. Частично они поступают в организм с пищевыми продуктами животного и растительного происхождения. Минеральные вещества используются как плас­тический материал (например, кальций, фосфор и др.) и как кофакторы фер­ментов.

    Минеральные вещества относятся к незаменимым факторам пищи. Хотя возможна относительная взаимозаменяемость некоторых минеральных эле­ментов в биологических процессах, но невозможность их взаимопревращения в организме является причиной незаменимости этих веществ. Кофакторная часть пищевых минеральных веществ сродни Витаминам.

    Суточная потребность взрослого организма человека в отдельных мине­ральных веществах сильно колеблется от нескольких граммов (макроэлемен­ты) до нескольких миллиграммов или микрограммов (микроэлементы, ультра­элементы) .

    Вода относится к незаменимым компонентам пищи, хотя небольшие ко­личества воды образуются из белков, липидов и углеводов при обмене их в тканях. Вода поступает с продуктами биологического и небиологического происхождения. Суточная потребность для взрослого человека составляет 1750-2200 г.

    Термин «энергетическая ценность» отражает количество энергии, которая может высвободиться из пищевых веществ в результате биологического окисления при использовании ее на выполнение физиологических функций организма. Институт питания АМН при расчете энергетической ценности продукта рекомендует руководствоваться следующими уточненными коэффициентами энергетической ценности основных компонентов пищи, кДж/г: белки - 16,7; жиры - 37,7; усвояемые углеводы - 15,7. При определении энергетической ценности продукта необходимо учитывать усвояемость его отдельных пищевых веществ. Для ориентировочных расчетов Минздравом в 1961 г. рекомендованы следующие коэффициенты усвояемости, %: белки - 84,5; жиры - 94; углеводы (сумма усвояемых и неусвояемых) - 95,6. Для более точных расчетов необходимо также учитывать аминокислотный скор белка.

    На долю аминокислот (в составе белков и свободных) приходится более 95 % всего азота организма. Поэтому об общем состоянии аминокислотного и белкового обмена можно судить по азотистому балансу, т. е. разнице между количеством азота,поступающего с пищей, и количеством выделяемого азота (главным образом в составе мочевины). У взрослого здорового человека при нормальном питании имеет место азотистое равновесие, т. е. количество выделяемого азота равно количеству поступающего. В период роста организма, а также при выздоровлении после истощающих заболеваний выводится азота меньше, чем поступает, - положительный азотистый баланс. При старении, голодании и в течение истощающих заболеваний азота выводится больше, чем поступает, - отрицательный азотистый баланс. При положительном азотистом балансе часть аминокислот пищи задерживается в организме, включаясь в состав белков и клеточных структур; общая масса белков в организме увеличивается. Наоборот, при отрицательном азотистом балансе общая масса белков уменьшается (катаболическое состояние). Если из диеты исключить все белки, но полностью сохранить другие компоненты в количествах, обеспечивающих энергетические потребности организма, то азотистый баланс становится отрицательным. Примерно через неделю пребывания на такой диете количество выводимого азота стабилизируется, достигая величины около 4 г за сутки. Такое количество азота соответствует 25 г белка (или аминокислот). Следовательно, при белковом голодании организм ежесуточно расходует около 25 г белков собственных тканей. Практически такой же результат получается при исключении из диеты не всех белков, а только незаменимых аминокислот или даже только одной из них. При полном голодании отрицательный азотистый баланс еще больше, чем при исключении из пищи только белков. Это обусловлено тем, что аминокислоты, образующиеся при распаде тканевых белков, при полном голодании используются также и для обеспечения энергетических потребностей организма. В рационе, достаточном по калорийности, минимальное количество белков, необходимое для поддержания азотистого равновесия, составляет 30-50 г. Однако это количество не обеспечивает оптимума для здоровья и работоспособности. Взрослый человек при средней физической нагрузке должен получать около 100 г белков в сутки

    ИСТОЧНИКИ И ПУТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АМИНОКИСЛОТ В КЛЕТКАХ

    Фонд свободных аминокислот организма составляет примерно 35 г. Содержание свободных аминокислот в крови в среднем равно 35-65 мг/дл. Большая часть аминокислот входит в состав белков, количество которых в организме взрослого человека нормального телосложения составляет примерно 15 кг.

    Источники свободных аминокислот в клетках - белки пищи, собственные белки тканей и синтез аминокислот из углеводов. Многие клетки, за исключением высокоспециализированных (например, эритроцитов), используют аминокислоты для синтеза белков, а также большого количества других веществ: фосфолипидов мембран, гема, пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов, биогенных аминов (катехоламинов, гистамина) и других соединений (рис. 9-1).

    Какой-либо специальной формы депонирования аминокислот, подобно глюкозе (в виде гликогена) или жирных кислот (в виде триацилглицеролов), не существует. Поэтому резервом аминокислот могут служить все функциональные и структурные белки тканей, но преимущественно белки мышц, поскольку их больше, чем всех остальных.

    В организме человека в сутки распадается на аминокислоты около 400 г белков, примерно такое же количество синтезируется. Поэтому тканевые белки не могут восполнять затраты аминокислот при их катаболизме и использовании на синтез других веществ. Первичными источниками аминокислот не могут служить и углеводы, так как из них синтезируются только углеродная часть молекулы большинства аминокислот, а аминогруппа поступает от других аминокислот. Следовательно, основным источником аминокислот организма служат белки пищи.

    Рис. 9-1. Источники и пути использования аминокислот.

    Протеолитическне ферменты, участвующие в переваривании белков и пепти­дов, синтезируются и выделяются в полость пищеварительного тракта в виде проферментов, или зимогенов. Зимогены неактивны и не могут переваривать собственные белки клеток. Активируются протеолитические ферменты в про­свете кишечника, где действуют на пищевые белки.

    В желудочном соке человека имеются два протеолитических фермента - пепсин и гастрнксин, которые очень близки по строению, что указывает на образование их нз общего предшественника.

    Пепсин образуется в виде профермента - пепсиногена - в главных клет­ках слизистой желудка. Выделено несколько близких по строению пепсино-генов, из которых образуется несколько разновидностей пепсина: пепсин I , II (Па, Пб), III. Пепсиногены активируются с помощью соляной кислоты, вы­деляющейся обкладочными клетками желудка, и аутокаталитически, т. е. с по­мощью образовавшихся молекул пепсина.

    Ингибитор пепсина обладает резко основными свойствами, так как состоит из 8 остатков лизина и 4 остатков аргинина. Активация заключа­ется в отщеплении от N-конца пепсиногена 42 аминокислотных остатков; сна­чала отщепляется остаточный полипептид, а затем ингибитор пепсина.

    Пепсин относится к карбоксипротеиназам, содержащим остатки дикарбоновых аминокислот в активном центре с оптимумом рН 1,5-2,5.

    Субстратом пепсина являются белки - либо нативные, либо денатуриро­ванные. Последние легче поддаются гидролизу. Денатурацию белков пищи обеспечивает кулинарная обработка или действие соляной кислоты. Следует отметить следующие биологические функции соляной кислоты: 1) активация пепсиногена; 2) создание оптимума рН для действия пепсина и гастриксина в желудочном соке; 3) денатурация пищевых "белков; 4) антимикробное действие.

    От денатурирующего влияния соляной кислоты и переваривающего дей­ствия пепсина собственные белки стенок желудка предохраняет слизистый секрет, содержащий глнкопротеиды.

    Пепсин, являясь эндопептидаэой, быстро расщепляет в белках внутренние пептидные связи, образованные карбоксильными группами ароматических аминокислот - фенилаланина, тирозина и триптофана. Медленнее гидроли-зует фермент пептидные связи, образованные алифатическими и дикарбоновыми аминокислотами в полипептидной цепи. Гастрнксин близок к пепсину по молекулярной массе (31 500). Оптимум рН у него около 3,5. Гастриксин гидролизует пептидные связи, образуемые дикарбоновыми аминокислотами. Соотношение пепсин/гастриксин в желудоч­ном соке 4:1. При язвенной болезни соотношение меняется в пользу гастриксина.

    Присутствие в желудке двух протеиназ, из которых пепсин действует в сильнокислой среде, а гастриксин в среднекислой, позволяет организму легче приспосабливаться к особенностям питания. Например, растительно-молочное питание частично нейтрализует кислую среду желудочного сока, и рН благо­приятствует переваривающему действию не пепсина, а гастриксина. Послед­ний расщепляет связи в пищевом белке.

    Пепсин и гастриксин гидролизуют белки до смеси полипептидов (называе­мых также альбумозами и пептонами). Глубина переваривания белков в же­лудке зависит от длительности нахождения в нем пищи. Обычно это неболь­шой период, поэтому основная масса белков расщепляется в кишечнике.

    Протеолитическне ферменты кишечника. В кишечник протеолитические ферменты поступают из поджелудочной железы в виде проферментов: трипси-ногена, химотрипсиногена, прокарбоксипептидаз А и В, проэластазы. Активи­рование этих ферментов происходит путем частичного протеолиза их полипеп­тидной цепи, т. е. того фрагмента, который маскирует активный цектр проте­иназ. Ключевым процессом активирования всех проферментов является об­разование трипсина (рис. 31). Трипсиноген, поступающий из поджелудочной железы, активируется с помощью кишечной энтерокиназы, или энтеропептидазы, Кроме того, образующийся трипсин аутокэталитически способствует превращению трипсиногена я трипсин, Механизм активирования трипсиноге-на заключается в гидролизе одной пептидной связи, в результате чего осво­бождается N-концевой гексапептид, называемый ингибитором трипсина. Далее трипсин, разрывая пептидные связи в остальных проферментах, вызы­вает образование активных ферментов. При этом образуются три разновидно­сти химотрипсина, карбоксипептидазы А и В, эластаза.

    Кишечные протеиназы гидролизуют пептидные связи пищевых белков и полипептидов, образовавшихся после действия желудочных ферментов, до свободных аминокислот. Трипсин, химотрипсины, эластаза, будучи эндопепти-дазами, способствуют разрыву внутренних пептидных связей, дробя белки и по­липептиды на более мелкие фрагменты. Трипсин гидролизует пептидные связи, образованные главным образом карбоксильными группами лизина и аргинина, менее активен ои в отношении пептидных связей, образованных изолейцином.

    Химотрипсины наиболее активны в отношении пептидных связей, в обра­зовании которых принимает участие тирозин, феннлаланин, триптофан. По специфичности действия химотрипсин похож на пепсин. Эластаза гидроли­зует те пептидные связи в полипептидах, где находится пролин.

    Карбоксипептидаза А относится к цинксодержащим.ферментам. Она от­щепляет от подипептндов С-концевые ароматические и алифатические амино­кислоты, а карбоксипептидаза В - только С-кониевые остатки лизина и аргинина.

    N-концевые аминокислоты полипептидов отщепляет аминополипептидаза кишечника, которая активируется цинком или марганцем, а также цнетеином. В слизистой кишечника присутствуют дипептидазы, гидролизующие днпептиды на две аминокислоты. Дипептидазы активируются ионами кобальта, марганца и цистеином.

    Разнообразие протеолитических ферментов приводит к полному расщепле­нию белков до свободных аминокислот даже в том случае, если белки пред­варительно не подвергались действию пепсина в желудке. Поэтому больныепосле операции частичного или полного удаления желудка сохраняют способ­ность усваивать белки пищи.

    Билет 50-другой вариант

    Белки, поступающие с пищей, подвергаются в желудочно-кишечном тракте распаду при участии протеолитических ферментов или пептидгидролаз, которые ускоряют гидролитическое расщепление пептидных связей между аминокислотами. Различные пептидгидролазы обладают относительной специфичностью, они способны катализировать расщепление пептидных связей между определенными аминокислотами. Пептидгидролазы выделяются в неактивной форме (это предохраняет стенки пищеварительной системы от самопереваривания). Активируются они при поступлении пищи в соответствующий отдел желудочно-кишечного тракта или при виде и запахе пищи по механизму условного рефлекса. Активация пепсина и трипсина происходит по механизму автокатализа, другие пептидгидролазы активируются трипсином.

    Во рту белки пищи только механически измельчаются, но не подвергаются химическим изменениям, так как в слюне нет пептидгидролаз. Химическое изменение белков начинается в желудке при участии пепсина и соляной кислоты. Под действием соляной кислоты белки набухают, и фермент получает доступ во внутренние зоны их молекул. Пепсин ускоряет гидролиз внутренних (расположенных далеко от концов молекул) пептидных связей. В результате из белковой молекулы образуются высокомолекулярные пептиды. Если в желудок поступают сложные белки, пепсин и соляная кислота способны катализировать отделение их простетической (небелковой) группы.

    Высокомолекулярные пептиды в кишечнике подвергаются дальнейшим превращениям в слабощелочной среде под действием трипсина, химотрипсина и пептидаз. Трипсин ускоряет гидролиз пептидных связей, в образовании которых принимают участие карбоксильные группы аргинина и лизина; химотрипсин расщепляет пептидные связи, образованные с участием карбоксильных групп триптофана, тирозина и фенилаланина. В результате действия этих ферментов высокомолекулярные пептиды превращаются в низкомолекулярные и некоторое количество свободных аминокислот. Низкомолекулярные пептиды в тонком кишечнике подвергаются действию карбоксипептидаз А и В, отщепляющих концевые аминокислоты со стороны свободной аминогруппы, и аминопептидаз, делающих то же самое со стороны свободной аминогруппы. В результате образуются дипептиды, которые гидролизуются до свободных аминокислот под действием дипептидаз. Аминокислоты и некоторое количество низкомолекулярных пептидов всасываются кишечными ворсинками. Этот процесс требует затрат энергии. Часть аминокислот уже в стенках кишечника включаются в синтез специфических белков, большая же часть продуктов пищеварения поступает в кровь (95%) и в лимфу.

    Часть аминокислот, образовавшаяся в процессе пищеварения, и непереваренные белки нижних отделов кишечника подвергаются гниению под действием кишечных бактерий. Из некоторых аминокислот образуются ядовитые продукты: фенолы, амины, меркаптаны. Они частично выводятся из организма с калом, частично всасываются в кровь, переносятся ею в печень, где происходит их обезвреживание. Этот процесс требует значительных затрат энергии.

    Сложный белок в пищеварительной системе распадается на белок и простетическую группу. Простые белки подвергаются гидролизу до аминокислот. Превращения простетических групп происходят в соответствии с их химической природой. Гем хромопротеидов окисляется в гематин, который почти не всасывается в кровь, а выделяется с калом. Нуклеиновые кислоты в кишечнике гидролизуются при участии эндонуклеаз, экзонуклеаз и нуклеотидаз. Под действием эндонуклеаз из молекул нуклеиновых кислот образуются крупные осколки - олигонуклеотиды. Экзонуклеазы от концов молекул нуклеиновых кислот и олигонуклеотидов отщепляют мономеры - отдельные мононуклеотиды, которые под действием нуклеотидаз могут распадаться на фосфорную кислоту и нуклеозид. Мононуклеотиды и нуклеозиды всасываются в кровь и переносятся к тканям., где мононуклеотиды используются для синтеза специфических нуклеиновых кислот, а нуклеозиды подвергаются дальнейшему распаду.

    Механизм реакции трансаминирования непрост и протекает по типу "пинг-понг". Катализируют реакцию ферментыаминотрансферазы , Они являются сложными ферментами, в качестве кофермента имеют пиридоксальфосфат (активная формавитамина В 6).

    В тканях насчитывают около 10 аминотрансфераз, обладающие групповой специфичностью и вовлекающие в реакции все аминокислоты, кроме пролина , лизина , треонина , которые не подвергаются трансаминированию.

    Весь перенос аминогруппы совершается в две стадии :

      к пиридоксальфосфату сначала присоединяется первая аминокислота, отдает аминогруппу, превращается в кетокислоту и отделяется. Аминогруппа при этом переходит на кофермент и образуется пиридоксаминфосфат .

      на второй стадии к пиридоксаминфосфату присоединяется другая кетокислота, получает аминогруппу, образуется новая аминокислота и пиридоксальфосфат регенерирует.

    Схема реакции трансаминирования

    Роль и превращение пиридоксальфосфата сводится к образованию промежуточных соединений – шиффовых оснований (альдимин и кетимин). В первой реакции после отщепления воды образуется иминовая связь между остатком аминокислоты и пиридоксальфосфатом. Полученное соединение называется альдимин . Перемещение двойной связи приводит к образованиюкетимина , который гидролизуется водой по месту двойной связи. От фермента отщепляется готовый продукт – кетокислота.

    Механизм реакции трансаминирования

    После отщепления кетокислоты к комплексу пиридоксамин-фермент присоединяется новая кетокислота и процесс идет в обратном порядке: образуется кетимин, затем альдимин, после чего отделяется новая аминокислота.

    Реакции полного цикла трансаминирования

    Чаще всего аминокислоты взаимодействуют со следующими кетокислотами:

      пировиноградной с образованием аланина,

      щавелевоуксусной с образованием аспартата,

      α-кетоглутаровой с образованием глутамата.

    Однако аланин и аспартат в дальнейшем все равно передают свою аминогруппу на α-кетоглутаровую кислоту. Таким образом, в тканях осуществляется поток избыточных аминогрупп на один общий акцептор – α-кетоглутаровую кислоту. В итоге образуется большое количество глутаминовой кислоты .

    Пиридоксальфосфат катализирует реакции трансаминирования и декарбоксилирования аминокислот ,

    Трансаминирование играет важную роль в процессах мочевинообразования, глюконеогенеза, путях образования новых аминокислот.

    Реакции трансаминирования имеют чрезвычайно важное биологическое значение, так как они являются весьма вероятным способом, обеспечивающим связь между углеводами и белками. [3 ]

    В обмене веществ реакция трансаминирования играет важную и разнообразную роль. От нее зависят такие процессы, как 1) биосинтез аминокислот (трансаминированием завершается синтез не менее чем одиннадцати аминокислот); 2) распад аминокислот (см. ниже); 3) объединение путей углеводного и аминокислотного обмена и 4) синтез некоторых специфических соединений, в том числе мочевины и у-аминомасляной кислоты. [6 ]

    Билет 51-другой вариант

    Трансдезаминироваине - основной путь дезаминирования аминокислот. Оно происходит в два этапа. Первый - трансаминирование, т. е. перенос аминогруппы с любой аминокислоты на а-кетокислоту без промежуточного образования аммиака; второй - собственно окислительное дезаминирование аминокислоты. Поскольку в результате первого этапа аминогруппы «собира­ются» в составе глутаминовой кислоты, то второй этап связан с ее окислитель­ным дезаминированием. Рассмотрим каждый из этапов процесса трансдезаминирования.

    Реакция трансаминирования обратима, она катализируется ферментами - аминотрансферазами, или трансаминазами. Источником аминогрупп в реакции трансаминирования служат не толь­ко природные а-аминокислоты, но и многие р-, у-, б- н s-амннокнслоты, а также амиды аминокислот - глутамин и аспарагин.

    Большинство известных аминотрансфераз проявляют групповую специ­фичность, используя в качестве субстратов несколько аминокислот. Акцеп­тором аминогрупп в реакциях трансаминирования являются три а-кетокислоты: пируват, оксалоацетат и 2-оксоглутарат. Наиболее часто акцептором NH 2 -rpynn служит 2-оксоглутарат; при этом из него образуется глутаминовая кислота. При переносе аминогрупп на пируват или оксалоацетат образуются соответственно аланин или аспарагиновая кислота по уравнению

    Далее NН 2 -группы с вланина и аспарагнновой кислоты переносятся на 2-оксоглутарат. Эту реакцию катализируют высокоактивные аминотрансфе­разы: аланикаминотрансфераза (АЛТ) и аспаргатаминотрансфераза (ACT), обладающие субстратной специфичностью:

    Аминотрансферазы состоят из апофермента и кофермента. Коферментамн аминотрансфераз являются производные пиридоксина (витамина В 6) - пи-ридоксаль-5-фосфат (ПАЛФ) и пиридоксамин-5-фосфат (ПАМФ). Оба ко­фермента (см. строение их в гл. «Ферменты») обратимо переходят друг в друга в ходе реакции трансаминирования. Следует заметить, что аминотран­сферазы для катализа требуют оба кофермента в отличие от других фермен­тов, которые нуждаются в одном из них н бывают либо пиридоксальфосфат-зависимыми, либо пиридоксаминфосфатзависимыми.

    Механизм реакций ферментативного трансаминирования аминокислот был предложен советскими биохимиками (А. Е. Браунштейн и М. М. Шемя­кин) и зарубежными (Метцлер, Икава и Снелл). Согласно этому механизму NH 2 -rpynna аминокислот на первой стадии взаимодействует с альдегидной группой пирндоксальфосфата О-СН-ПАЛФ с образованием промежуточных шиффовых оснований типа альдимина и затем его таутомерной формы ке-тимана H 3 N-СН г -ПАМФ (шиффово основание пиридоксаминофосфата):

    Далее кетнмин гидролизуется с образованием кетоаналога исходной амино­кислоты и ПАМФ. На второй стадии ПАМФ взаимодействует с а-кетокисло-той (акцептором аминогрупп) и "все повторяется в обратном порядке, т. е. образуется сначала кетимин, затем альдимин. Последний гидролизуется. В результате образуются новая аминокислота и ПАЛФ. Таким образом, коферменты аминотрансфераз выполняют функцию переносчика аминогрупп путем" перехода из альдегидной формы в аминированную и обратно.

    Биологический смысл реакций трансаминирования состоит в том, чтобы собрать аминогруппы всех распадающихся аминокислот в соста­ве молекул всего одного типа аминокислоты, а именно глутаминовой.

    Реакции трансаминирования :

      активируются в печени, мышцах и других органах при поступлении в клетку избыточного количества тех или иных аминокислот – с целью оптимизации их соотношения,

      обеспечивают синтез заменимых аминокислот в клетке при наличии их углеродного скелета (кетоаналога),

      начинаются при прекращении использования аминокислот на синтез азотсодержащих соединений (белков, креатина, фосфолипидов, пуриновых и пиримидиновых оснований) – с целью дальнейшего катаболизма их безазотистого остатка и выработки энергии,

      необходимы при внутриклеточном голодании, например, при гипогликемиях различного генеза – для использования безазотистого остатка аминокислот в печени для кетогенеза и глюконеогенеза, в других органах – для его прямого вовлечения в реакции цикла трикарбоновых кислот.

      при патологиях (сахарный диабет, гиперкортицизм) обуславливают наличие субстратов для глюконеогенеза и способствуют патологической гипергликемии.

    Продукт трансаминирования глутаминовая кислота :

      является одной из транспортных форм аминного азота в гепатоциты,

      способна реагировать со свободным аммиаком, обезвреживая его.

    В анаэробном процессе пировиноградная кислота восстанавливается до молочной кислоты (лактата), поэтому в микробиологии анаэробный гликолиз называют молочнокислым брожением. Лактат является метаболическим тупиком и далее ни во что не превращается, единственная возможность утилизовать лактат – это окислить его обратно в пируват.

    Многие клетки организма способны к анаэробному окислению глюкозы. Для эритроцитов он является единственным источником энергии. Клетки скелетной мускулатуры за счет бескислородного расщепления глюкозы способны выполнять мощную, быструю, интенсивную работу, как, например, бег на короткие дистанции, напряжение в силовых видах спорта. Вне физических нагрузок бескислородное окисление глюкозы в клетках усиливается при гипоксии – при различного рода анемиях , при нарушении кровообращения в тканях независимо от причины.

    Гликолиз

    Анаэробное превращение глюкозы локализуется в цитозоле и включает два этапа из 11 ферментативных реакций.

    Первый этап гликолиза

    Первый этап гликолиза – подготовительный , здесь происходит затрата энергии АТФ, активация глюкозы и образование из нее триозофосфатов .

    Первая реакция гликолиза сводится к превращению глюкозы в реакционно-способное соединение за счет фосфорилирования 6-го, не включенного в кольцо, атома углерода. Эта реакция является первой в любом превращении глюкозы, катализируется гексокиназой .

    Вторая реакция необходима для выведения еще одного атома углерода из кольца для его последующего фосфорилирования (фермент глюкозофосфат-изомераза ). В результате образуется фруктозо-6-фосфат.

    Третья реакция – фермент фосфофруктокиназа фосфорилирует фруктозо-6-фосфат с образованием почти симметричной молекулы фруктозо-1,6-дифосфата. Эта реакция является главной в регуляции скорости гликолиза.

    В четвертой реакции фруктозо-1,6-дифосфат разрезается пополам фруктозо-1,6-дифосфат- альдолазой с образованием двух фосфорилированных триоз-изомеров – альдозы глицеральдегида (ГАФ) и кетозы диоксиацетона (ДАФ).

    Пятая реакция подготовительного этапа – переход глицеральдегидфосфата и диоксиацетонфосфата друг в друга при участии триозофосфатизомеразы . Равновесие реакции сдвинуто в пользу диоксиацетонфосфата, его доля составляет 97%, доля глицеральдегидфосфата – 3%. Эта реакция, при всей ее простоте, определяет дальнейшую судьбу глюкозы:

    • при нехватке энергии в клетке и активации окисления глюкозы диоксиацетонфосфат превращается в глицеральдегидфосфат, который далее окисляется на втором этапе гликолиза,
    • при достаточном количестве АТФ, наоборот, глицеральдегидфосфат изомеризуется в диоксиацетонфосфат, и последний отправляется на синтез жиров.

    Второй этап гликолиза

    Второй этап гликолиза – это освобождение энергии , содержащейся в глицеральдегидфосфате, и запасание ее в форме АТФ .

    Шестая реакция гликолиза (фермент глицеральдегидфосфат-дегидрогеназа ) – окисление глицеральдегидфосфата и присоединение к нему фосфорной кислоты приводит к образованию макроэргического соединения 1,3-дифосфоглицериновой кислоты и НАДН.

    В седьмой реакции (фермент фосфоглицераткиназа ) энергия фосфоэфирной связи, заключенная в 1,3-дифосфоглицерате тратится на образование АТФ. Реакция получила дополнительное название – , что уточняет источник энергии для получения макроэргической связи в АТФ (от субстрата реакции) в отличие от окислительного фосфорилирования (от электрохимического градиента ионов водорода на мембране митохондрий).

    Восьмая реакция – синтезированный в предыдущей реакции 3-фосфоглицерат под влиянием фосфоглицератмутазы изомеризуется в 2-фосфоглицерат.

    Девятая реакция – фермент енолаза отрывает молекулу воды от 2-фосфоглицериновой кислоты и приводит к образованию макроэргической фосфоэфирной связи в составе фосфоенолпирувата.

    Десятая реакция гликолиза – еще одна реакция субстратного фосфорилирования – заключается в переносе пируваткиназой макроэргического фосфата с фосфоенолпирувата на АДФ и образовании пировиноградной кислоты.

    11. Молочная кислота (лактат). Лактат является метаболическим продуктом анаэробного гликолиза и в нормальных условиях находится в равновесии с его непосредственным предшественником пируватом. Лактат образуется из пирувата в качестве конечного продукта анаэробного гликолиза. Эта окислительно-восстановительная реакция требует восстановленного никотинамидаденин-динуклеотида (NADH) и иона водорода (Н+) и катализируется лактатдегидрогеназой (ЛДГ). Реакция выражается следующим уравнением: Пируват + NADH+ЛДГ H+ *=t Лактат + NAD. Лактат может элиминироваться только путем превращения в пируват, концентрация лактата тесно связана с судьбой пирувата. Печень и почки являются основными органами, потребляющими лактат. При изъятии лактата главным метаболическим путем, используемым этими органами, становится глюконеогенез. Почки осуществляют клиренс лактата в основном через глюконеогенез. Скелетная мускулатура и миокард способны поглощать некоторое количество лактата из циркуляции; значение этого пути клиренса не представляется достаточно ясным. Утилизация лактата скелетной мускулатурой может зависеть от концентрации лактата в крови и от состояния (активного или пассивного) мышцы.

    Молочнокислый ацидоз может рассматриваться как нарушение равновесия между скоростью продукции лактата в тканях с активным гликолизом и скоростью его утилизации тканями с активным глюконеогенезом.

    12. Гликолиз - это анаэробный процесс. При расчете энергетического эффекта биохимического процесса в анаэробных условиях следует учитывать:

    1) затраты АТФ (как правило, в фосфотрансферазных реакциях);

    2) образование АТФ в процессах субстратного фосфорилирования.

    В первом этапе гликолиза происходит затрата 2 моль АТФ: на фосфорилирование глюкозы и на фосфорилирование глюкозо-6-фосфата. Еще раз заострим внимание на том, что из 1 моль глюкозы образуется 2 моль 3-фосфоглицеринового альдегида, который вступает во второй этап гликолиза.

    Во втором этапе гликолиза можно найти две реакции субстратного фосфорилирования, в которых образуется 2 моль АТФ при распаде 1 моль 3-фосфоглицеринового альдегида. Следовательно, при распаде 2 моль 3-фосфоглицеринового альдегида образуется 4 моль АТФ. Суммируя полученное и затраченное количество АТФ, получаем суммарный энергетический эффект гликолиза - 2 моль АТФ .

    13. Ключевые ферменты гликолиза.

    1. Гексокиназа - это регуляторный фермент гликолиза во внепеченочных клетках. Гексокиназа аллостерически ингибируется глюкозо-6-фосфатом. Глюкокиназа - регуляторный фермент гликолиза в гепатоцитах. Синтез глюкокиназы индуцируется инсулином.

    2. Фосфофруктокиназа-1. Это главный ключевой фермент, катализирует реакцию, лимитирующую скорость всего процесса (наиболее медленная реакция). Синтез фермента индуцируется инсулином. Аллостерические активаторы - АМФ, АДФ, фруктозо-2,6- дифосфат. Уровень фруктозо-2,6-дифосфата увеличивается под действием инсулина и понижается под действием глюкагона. Аллостерические ингибиторы - АТФ, цитрат.

    3. Пируваткиназа. Фермент активен в нефосфорилированной форме. Глюкагон (в гепатоцитах) и адреналин (в миоцитах) стимулируют фосфорилирование фермента, а значит инактивируют фермент. Инсулин, наоборот, стимулирует дефосфорилирование фермента, а значит активирует фермент. Аллостерический активатор - Фр-1,6-ФФ. Аллостерический ингибитор - АТФ, ацетил КоА. Синтез фермента индуцирует инсулин.

    Аллостерическая регуляция скорости гликолиза , зависимая от изменения соотношения АТФ/АДФ, направлена на изменение скорости использования глюкозы непосредственно клетками печени. Глюкоза в клетках печени используется не только для синтеза гликогена и жиров, но также и как источник энергии для синтеза АТФ. Основными потребителями АТФ в гепатоцитах являются процессы трансмембранного переноса веществ, синтез белков, гликогена, жиров, глюконеогенез. От скорости утилизации АТФ в этих процессах зависит скорость его синтеза. АТФ, АДФ и АМФ, а также NAD+ и NADH служат аллостерическими эффекторами некоторых гликолитических ферментов и ферментов глюконеогенеза. В частности, АМФ активирует фосфофруктокиназу и ингибирует фруктозо-1,6-бисфосфатазу. АТФ и NADH ингибируют пируваткиназу, а АДФ активирует пируваткарбоксилазу.

    14. Глико́лиз (фосфотриозный путь, или шунт Эмбдена - Мейерхофа, или путь Эмбдена-Мейергофа-Парнаса) - ферментативный процесс последовательного расщепления глюкозы в клетках, сопровождающийся синтезом АТФ. Гликолиз при аэробных условиях ведёт к образованию пировиноградной кислоты (пирувата), Гликолиз является основным путём катаболизма глюкозы в организме животных и человека.

    Аэробный распад глюкозы можно выразить суммарным уравнением:

    С6Н12О6 + 6 О2 → 6 СО2 + Н2О + 2820 кДж/моль.

    Этот процесс включает несколько стадий:

      Аэробный гликолиз - процесс окисления глюкозы с образованием двух молекул пирувата;

      Общий путь катаболизма, включающий превращение пирувата в ацетил-КоА и его дальнейшее окисление в цитрантом цикле;

      ЦПЭ на кислород, сопряжённая с реакциями дегидрирования, происходящими в процессе распада глюкозы.

    15. Окислительное декарбоксилирование ПВК катализирует пируватдегидрогеназа. В состав пируватдегидрогеназного комплекса входит несколько структурно связанных ферментных белков и коферментов. ТПФ (Тиаминпирофосфат) катализирует начальную реакцию декарбоксилирования ПВК. Эта реакция идентична катализируемой пируватдекарбоксилазой. Однако в отличие от последней, пируватдегидрогеназа не превращает промежуточный продукт гидроксиэтил-ТПФ в ацетальдегид. Вместо этого гидроксиэтильная группа переносится к следующему ферменту в мультиферментной структуре пируватдегидрогеназного комплекса.

    Окислительное декарбоксилирование ПВК является одной из ключевых реакций в обмене углеводов. В результате этой реакции ПВК, образовавшаяся при окислении глюкозы, включается в главный метаболический путь клетки - цикл Кребса, где окисляется до углекислоты и воды с выделением энергии. Таким образом, благодаря реакции окислительного декарбоксилирования ПВК создаются условия для полного окисления углеводов и утилизации всей заключенной в них энергии. Кроме того, образующаяся при действии ПДГ-комплекса активная форма уксусной кислоты служит источником для синтеза многих биологических продуктов: жирных кислот, холестерина, стероидных гормонов, ацетоновых тел и других.

    Пируватдегидрогеназный комплекс (ПДК) - комплекс трех ферментов, который осуществляет окислительное декарбоксилирование пирувата. Продуктами окисления являются углекислый газ, ацетил-КоА, НАДН.Н+.

    Пируватдегидрогеназный комплекс включает в себя 3 фермента, 3 кофактора (простетическая группа, связанная с апоферментом прочно ковалентно), 2 кофермента (простетическая группа, связанная с апоферментом непрочно нековалентно):

      Е1 - пируватдегидрогеназа декарбоксилирующая.

    Кофактором является активная форма витамина В1 - тиаминпирофосфат.

      Е2 - дигидролипоилацетилтрансфераза.

    Кофактором является витаминоподобное вещество - липоевая кислота, которая присоединив 2 атома водорода может превращаться в дигидролипоил.

    Коферментом является активная форма пантотеновой кислоты - НS-КоА, она принимает ацетильный остаток от липоевой кислоты.

      Е3 - дигидролипоилдегидрогеназа.

    Кофактором является флавинадениндинуклеотид (ФАД) - активная форма витамина В2.

    Коферментом является активная форма витамина PP - никотинамидадениндинуклеотид (НАД+).

    СН3-СО-СООН + НS-КоА + НАД+ => СО2 + СН3-СО~SKoA + НАДН.Н+

    Суммарное уравнение

    Последовательность реакций, катализируемых ПДК.

    16. Энергетическое значение аэробного распада глюкозы.

    При аэробном окислении 1 молекулы глюкозы образуется 2 молекулы ПВК, которые диффундируют в митохондрии и подвергаются окислительному декарбоксилированию с образованием 2 молекул АУК. При этом образуется 2 молекулы НАДН2, которые окисляются в БО, давая 6 АТФ. 2 АУК окисляются в ЦТК, давая 6 НАДН2, 2ФПН2 и 2АТФ, что в сумме даст 24 АТФ. Т.о., в митохондриях получается 24+6=30АТФ.

    Значение: Гликолиз - катаболический путь исключительной важности. Он обеспечивает энергией клеточные реакции, в том числе и синтез белка. Промежуточные продукты гликолиза используются при синтезе жиров. Пируват также может быть использован для синтеза аланина, аспартата и других соединений. Благодаря гликолизу производительность митохондрий и доступность кислорода не ограничивают мощность мышц при кратковременных предельных нагрузках.

    Жиры синтезируются только при наличии энергии. убстратом для синтеза жиров de novo является глюкоза.

    Как известно, попадая в клетку, глюкоза превращается в гликоген, пентозы и окисляется до пировиноградной кислоты. При высоком поступлении глюкоза используется для синтеза гликогена, но этот вариант ограничивается объемом клетки. Поэтому глюкоза "проваливается" в гликолиз и превращается в пируват либо напрямую, либо через пентозофосфатный шунт. Во втором случае образуется НАДФН, который понадобится впоследствии для синтеза жирных кислот.

    17. Глюконеогенез – синтез глюкозы из неуглеводных продуктов. Такими продуктами или метаболитами являются в первую очередь молочная и пи-ровиноградная кислоты, так называемые гликогенные аминокислоты, гли-церол и ряд других соединений. Иными словами, предшественниками глюкозы в глюконеогенезе может быть пируват или любое соединение, превращающееся в процессе катаболизма в пируват или один из промежуточных продуктов цикла трикарбоновых кислот.

    У позвоночных наиболее интенсивно глюконеогенез протекает в клетках печени и почек (в корковом веществе).

    Большинство стадий глюконеогенеза представляет собой обращение реакции гликолиза. Только 3 реакции гликолиза (гексокиназная, фосфо-фруктокиназная и пируваткиназная) необратимы, поэтому в процесс глю-конеогенеза на 3 этапах используются другие ферменты.

    Образование фосфоенолпирувата из пирувата . Синтез фосфоенолпирувата осуществляется в несколько этапов. Первоначально пируват под влиянием

    пируваткарбоксилазы и при участии СО2 и АТФ карбоксилируется с образованием оксалоацетата:

    Затем оксалоацетат в результате декарбоксилирования и фосфорили-рования под влиянием фермента фосфоенолпируваткарбоксилазы превращается в фосфоенолпируват. Донором фосфатного остатка в реакции служит гуанозинтрифосфат (ГТФ):

    Первый этап синтеза протекает в митохондриях (рис. 10.6). Пируват-карбоксилаза, которая катализирует эту реакцию, является аллостери-ческим митохондриальным ферментом. В качестве аллостерического активатора данного фермента необходим ацетил-КоА. Мембрана митохондрий непроницаема для образовавшегося оксалоацетата. Последний здесь же, в митохондриях, восстанавливается в малат:

    Реакция протекает при участии митохондриальной НАД-зависимой малатдегидрогеназы. В митохондриях отношение НАДН/НАД+ относительно велико, в связи с чем внутримитохондриальный оксалоацетат легко восстанавливается в малат, который легко выходит из митохондрии через митохондриальную мембрану. В цитозоле отношение НАДН/НАД+ очень мало, и малат вновь окисляется при участии цитоплазматической НАД-за-висимой малатдегидрогеназы:

    Дальнейшее превращение оксалоацетата в фосфоенолпируват происходит в цитозоле клетки.

    Превращение фруктозо-1,6-бисфосфата во фруктозо-6-фосфат. Фосфо-енолпируват, образовавшийся из пирувата, в результате ряда обратимых реакций гликолиза превращается во фруктозо-1,6-бисфосфат. Далее следует фосфофруктокиназная реакция, которая необратима. Глюконеогенез идет в обход этой эндергонической реакции. Превращение фруктозо-1,6-бис-фосфата во фруктозо-6-фосфат катализируется специфической фосфатазой:

    Образование глюкозы из глюкозо-6-фосфата. В последующей обратимой стадии биосинтеза глюкозы фруктозо-6-фосфат превращается в глюкозо-6-фосфат. Последний может дефосфорилироваться (т.е. реакция идет в обход гексокиназной реакции) под влиянием фермента глюкозо-6-фос-фатазы:

    18. Цикл Кори - совокупность биохимических ферментативных процессов транспорта лактата из мышц в печень, и дальнейшего синтеза глюкозы из лактата, катализируемое ферментами глюконеогенеза.

    При интенсивной мышечной работе, а также в условиях отсутствия или недостаточного числа митохондрий (например, в эритроцитах или мышцах) глюкоза вступает на путь анаэробного гликолиза с образованием лактата. Лактат не может далее окисляться, он накапливается (при его накоплении в мышцах раздражаются чувствительные нервные окончания, что вызывает характерное жжение в мышцах). С током крови лактат поступает в печень. Печень является основным местом скопления ферментов глюконеогенеза (синтез глюкозы из неуглеводных соеднений), и лактат идет на синтез глюкозы.

    Реакция превращения лактата в пируват катализируется лактатдегидрогеназой, далее пируват подвергается окислительному декарбоксилированию или может подвергаться брожению.

    Цикл Кори

    19. В условиях голодания часть белков мышечной ткани распадается до аминокислот, которые далее включаются в процесс катаболизма. Аминокислоты, которые при катаболизме превращаются в пируват или метаболиты цитратного цикла, могут рассматриваться как потенциальные предшественники глюкозы и гликогена и носят название гликогенных. Например, окса-лоацетат, образующийся из аспарагиновой кислоты, является промежуточным продуктом как цитратногр цикла, так и глюконеогенеза.

    Из всех аминокислот, поступающих в печень, примерно 30% приходится на долю аланина. Это объясняется тем, что при расщеплении мышечных белков образуются аминокислоты, многие из которых превращаются сразу в пируват или сначала в оксалоацетат, а затем в пируват. Последний превращается в аланин, приобретая аминогруппу от других аминокислот. Аланин из мышц переносится кровью в печень, где снова преобразуется в пируват, который частично окисляется и частично включается в глюкозонеогенез. Следовательно, существует следующая последовательность событий (глюкозо-аланиновый цикл): глюкоза в мышцах → пируват в мышцах → аланин в мышцах → аланин в печени → глюкоза в печени → глюкоза в мышцах. Весь цикл не приводит к увеличению количества глюкозы в мышцах, но он решает проблемы транспорта аминного азота из мышц в печень и предотвращает лактоацидоз.

    20. Регуляция гликолиза

    Различают местную и общую регуляцию.

      Местная регуляция осуществляется путём изменения активности ферментов под действием различных метаболитов внутри клетки.

      Регуляция гликолиза в целом, сразу для всего организма, происходит под действием гормонов, которые, влияя через молекулы вторичных посредников, изменяют внутриклеточный метаболизм.

    Важное значение в стимуляции гликолиза принадлежит инсулину. Глюкагон и адреналин являются наиболее значимыми гормональными ингибиторами гликолиза.

    Инсулин стимулирует гликолиз через:

      активацию гексокиназной реакции;

      стимуляцию фосфофруктокиназы;

      стимуляцию пируваткиназы.

    Также на гликолиз влияют и другие гормоны. Например, соматотропин ингибирует ферменты гликолиза, а тиреоидные гормоны являются стимуляторами.

    Регуляция гликолиза осуществляется через несколько ключевых этапов. Реакции, катализируемые гексокиназой (1), фосфофруктокиназой (3) и пируваткиназой (10) отличаются существенным уменьшением свободной энергии и являются практически необратимыми, что позволяет им быть эффективными точками регуляции гликолиза.

    Регуляция глюконеогенеза. Уменьшение количества углеводов в клетках или снижение сахара в крови является основным стимулом для увеличения скорости глюконеогенеза. Кроме того, уменьшение количества углеводов может стать причиной изменения направления гликолитических или фосфоглюконатных реакций, что способствует превращению дезаминированных аминокислот в углеводы, наряду с глицеролом. Такой гормон, как кортизол, играет особенно важную роль в регуляции процессов глюконеогенеза.